| Mechlppdk基因在木薯中的表达分析及RNA干扰载体构建和遗传转化 |
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| 引用本文： | 王海燕,陈新,周新成,沈旭,孔华,王文泉.Mechlppdk基因在木薯中的表达分析及RNA干扰载体构建和遗传转化[J].中国农学通报,2021,37(17):19-25. |
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| 作者姓名： | 王海燕 陈新 周新成 沈旭 孔华 王文泉 |
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| 作者单位： | 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海口 571101;2.南京农业大学生命科学院,南京 210095;3.海南大学热带作物学院,海口 570228 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金“木薯UGT85K4基因在培育抗旱和低氰木薯中功能的研究”(31701509);国家自然科学基金“基于CRISPR/Cas9 技术获得高直、支链淀粉木薯新种质的研究”(31771883) |
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| 摘 要： | 本研究为了明确丙酮酸磷酸双激酶(ppdk)在木薯中的表达谱,创制Mechlppdk的干扰株系,以期为Mechlppdk的功能研究提供材料。本研究以栽培型木薯Arg7为材料,用qPCR的方法分析Mechlppdk在木薯根、茎、叶中的表达谱;采用RNA干扰的方法,构建Mechlppdk的干扰载体,并遗传转化木薯脆性愈伤,经木薯再生体系获得转基因苗,在添加抗生素的培养基上进行生根筛选,经PCR鉴定获得Mechlppdk的干扰株系。用qPCR的方法鉴定Mechlppdk在干扰株系的表达情况。结果表明,Mechlppdk在木薯叶片中表达量最高,达到管家基因的50%。在Mechlppdk的转运肽区,选取1个保守区段设计引物,构建RNA干扰表达载体pART27-Mechlppdki,将表达载体转化农杆菌LBA4404,侵染木薯脆性胚愈伤,获得阳性转基因木薯苗7个株系。通过qPCR分析发现各株系Mechlppdk转录本有不同程度的降低。通过以上分析表明本研究获得了干扰效率较高木薯Mechlppdk干扰株系,将为解析木薯Mechlppdk的功能提供研究材料。
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| 关 键 词： | 丙酮酸磷酸双激酶 表达谱 RNA干扰 表达载体 木薯 遗传转化 脆性愈伤 转基因苗 PCR鉴定 |
| 收稿时间： | 2020-08-14 |
Expression Analysis of Mechlppdk Gene in Cassava and Construction of RNA Interference Vector and Genetic Transformation |
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| Wang Haiyan,Chen Xin,Zhou Xincheng,Shen Xu,Kong Hua,Wang Wenquan.Expression Analysis of Mechlppdk Gene in Cassava and Construction of RNA Interference Vector and Genetic Transformation[J].Chinese Agricultural Science Bulletin,2021,37(17):19-25. |
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| Authors: | Wang Haiyan Chen Xin Zhou Xincheng Shen Xu Kong Hua Wang Wenquan |
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| Institution: | 1.The Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology, CATAS, Haikou, Hainan 571101;2.College of Life Science, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095;3.College of Tropical Crops, Hainan University, Haikou 570228 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pyruvate phosphate dikinase expression profile RNA interference expression vector Manihot esculenta genetic transformation friable callus transgenic plantlets PCR identification |
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