| 高盐极端环境土壤基因组DNA的分离纯化方法研究及基因文库的构建 |
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| 引用本文： | 孙栋,唐莉丽,王倩倩,杨冬梅,蒋承建,武波.高盐极端环境土壤基因组DNA的分离纯化方法研究及基因文库的构建[J].广西农业生物科学,2006,25(1):24-29. |
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| 作者姓名： | 孙栋 唐莉丽 王倩倩 杨冬梅 蒋承建 武波 |
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| 作者单位： | 广西大学,微生物及植物遗传工程教育部重点实验室,广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,广西,南宁,530005 |
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| 基金项目： | 国家863计划资助项目(2001AA214141) |
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| 摘 要： | 以钦州市犀牛角镇晒盐池内(盐浓度>25%)的土壤样品为研究对象,对土壤混合基因组DNA的提取和纯化方法进行了深入研究,结果表明,冻融法、十二烷基磺酸钠(SDS)和蛋白酶K联合使用的提取法,能有效提高DNA得率,DNA的产量达到每克土壤样品10~15μg。交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、Sephadex G-200树脂以及大量胶回收的使用,可有效纯化DNA,纯化的DNA产量可达每克土壤样品4~6μg,DNA片段大小>30 kb。将纯化的DNA用B amHⅠ部分酶切后构建以pLAFR 3为载体的混合基因组文库,该文库包含15 600个克隆,外源片段DNA平均大小为18 kb。通过DNA序列测定和同源性比较,对从文库中随机挑取的10个克隆进行了序列分析,发现9个外源插入片段包含未知DNA序列。
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| 关 键 词： | 土壤 DNA提取 DNA纯化 混合基因组DNA文库 |
| 文章编号： | 1008-3464(2006)01-0024-06 |
| 修稿时间： | 2005年4月28日 |
Evaluation and optimization of DNA extraction and purification from hypersaline environmental samples and construction of metagenomic library |
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| SUN Dong,TANG Li-li,WANG Qian-qian,YANG Dong-mei,JIANG Cheng-jian,WU Bo.Evaluation and optimization of DNA extraction and purification from hypersaline environmental samples and construction of metagenomic library[J].Journal of Guangxi Agricultural and Biological Science,2006,25(1):24-29. |
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| Authors: | SUN Dong TANG Li-li WANG Qian-qian YANG Dong-mei JIANG Cheng-jian WU Bo |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | soil DNA extraction DNA purification the metagenomic library |
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