适合流式细胞仪分析的梨叶片细胞核提取缓冲液筛选

适宜的缓冲液是制备植物完整细胞核的关键。为了筛选提取梨(Pyrus)细胞核的适宜缓冲液,本实验以新疆库尔勒香梨(Pyrus sinkiangensis)组培苗叶片为材料,用剪切法提取细胞核,综合分析五种解离液(通用缓冲液(general purpose buffer,GPB)、木本植物缓冲液(woody plant buffer,WPB)、Otto's Buffer(OTTO)、加尔布雷思缓冲液(Galbraith's buffer,Galbraith's)和改良猕猴桃解离液(N-(2-hydroxyethy1)piperazine-N'-(2-ethanesulfonic acid),4-羟乙基哌嗪乙磺酸,HEPES))制备的悬浮液细胞核形态特征、DNA相对含量和细胞核提取效率。结果显示:相比WPB、Galbraith's和HEPES这3种解离液,GPB和OTTO提取的细胞核悬浮液有较多碎片和杂质,以至于影响流式图峰值的形成;WPB、Galbraith's和HEPES这3种解离液提取的细胞核悬浮液虽然在G0/G1期均形成了呈正态分布的、变异系数小于5%的DNA相对含量直方图,但是这3种解离液中只有WPB和Galbraith's在G2/M期也形成了DNA峰;另外,从提取细胞核的效率上来看,Galbraith's解离液提取细胞核的效率高于WPB解离液。本实验筛选Galbraith's解离液为提取梨细胞核的适宜缓冲液,为后续进一步开展植物细胞学和分子生物学相关研究奠定了基础。