| piggyBac转座酶的瞬时表达对莱茵衣藻体内piggyBac转座子的作用 |
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| 引用本文： | 齐淑圆,Majid ESHAGHI,Deying SUN,何靖,杨小杭,刘建华.piggyBac转座酶的瞬时表达对莱茵衣藻体内piggyBac转座子的作用[J].农业生物技术学报,2016(11):1643-1651. |
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| 作者姓名： | 齐淑圆 Majid ESHAGHI Deying SUN 何靖 杨小杭 刘建华 |
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| 作者单位： | 1. 浙江大学生命科学学院,杭州310058;浙江大学海洋学院,舟山316000;2. 新加坡基因组研究所,新加坡,138672;3. 浙江大学舟山海洋研究中心,舟山,316021;4. 浙江大学生命科学学院,杭州,310058;5. 浙江大学海洋学院,舟山316000;浙江大学舟山海洋研究中心,舟山316021 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.31571392)和舟山市科技局专项合作项目(No.2015C51024) |
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| 摘 要： | piggyBac转座系统作为一种遗传修饰的工具,在很多生物体如哺乳动物、昆虫、酵母中已经得到了广泛应用.然而,目前piggyBac转座系统在绿藻一莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardti)中是否有活性很少有入研究.本研究构建含有一个拷贝或多个拷贝并且能够稳定表达piggyBac转座元件的莱茵衣藻藻株.然后在含有转座元件的藻株中瞬时表达普通的piggyBac转座酶和密码子优化后的piggyBac转座酶,通过限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析piggyBac转座元件的转座现象.转座酶转入莱茵衣藻细胞内一周和两周之后与转入之前的RFLP图谱对比,有很明显的差异.转入转座酶一周后的TR1藻株原有的1.5kb大小的片段消失,同时出现了3条新的片段:2.8、4.2和6.5 kb.两周之后,这3条片段又发生了变化,表明转座现象存在并且持续发生.转入密码子优化后转座酶一周后的TR3藻株中,1.5、3和4kb大小的片段没有发生改变,但是6.5 kb大小的片段消失了,与此同时新出现了一个2.8 kb大小的片段.两周之后,TR3的限制性片段多态性图谱并没有发生变化.为了检测转座酶是否成功转入细胞中,我们在新的接头序列两侧进行侧翼PCR,同时对PCR产物进行序列比对分析,结果显示,piggyBac转座子偶尔会在非常规性位点5’-TTT-3’和5’-ACGCAG-3’处发生剪切,而常规性剪切位点发生在5’-TTAA-3’处.研究结果表明,piggyBac转座酶对莱茵衣藻体内piggyBac转座子具有转座作用,piggyBac转座系统可以用于莱茵衣藻的遗传学修饰.
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| 关 键 词： | 遗传学修饰 绿藻 非常规性剪切 piggyBac转座子 限制性片段长度多态性分析 |
Transposition of PiggyBac (PB) Element is Attributed to Transient Expression of PB Transposase in Chlamydomonas reinhardtii |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Genetic modification Green microalgae Illegitimate excision PiggyBac transposon RFLP |
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