| 绵羊肺炎支原体hlyA基因的表达及活性初步鉴定 |
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| 引用本文： | 孙远航,李敏,王晶,罗海霞,何玉龙,郝秀静,王玉炯.绵羊肺炎支原体hlyA基因的表达及活性初步鉴定[J].农业生物技术学报,2016(3):435-442. |
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| 作者姓名： | 孙远航 李敏 王晶 罗海霞 何玉龙 郝秀静 王玉炯 |
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| 作者单位： | 宁夏大学生命科学学院/西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室,银川,750021 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No.31460660 |
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| 摘 要： | 绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)可引起绵羊(Ovis aries)及山羊(Capra hircus)的支原体性肺炎,分布广泛,危害严重.本实验在课题组前期完成MO Y98株基因组测序的基础上,通过基因注释、PCR等获得了该菌株可能的溶血素(hemolysin,hlyA)基因;依据大肠杆菌(Escherichia coli)优势密码子对hlyA基因进行优化,构建优化后hlyA原核表达质粒pET32a-hlyA;将该质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,获得了相应的重组菌株,并对重组菌株进行诱导表达;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot对表达的重组蛋白进行鉴定,并经Ni2+金属螯合柱纯化.克隆了MO hlyA基因序列(GenBank登录号:KT598390),片段大小为375 bp,编码125个氨基酸.优化后密码子适应指数为0.91,目的基因适于在大肠杆菌中表达.重组融合蛋白多以包涵体的形式存在,其相对分子质量约为31.6 kD,与预期大小一致.Western blot结果显示,上清中纯化出的目的蛋白能与一抗发生反应,重组蛋白特异性较好.溶血实验表明,当纯化后蛋白浓度稀释到0.125 μg/mL时,溶解红细胞的能力已经下降.该研究结果为后续绵羊肺炎支原体致病性研究提供了基础资料.
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| 关 键 词： | 绵羊肺炎支原体(MO) 溶血素(hlyA) 密码子优化 溶血活性 |
Expression and Preliminary Activity Identification of hlyA Gene from Mycoplasma ovipneumoniae |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mycoplasma ovipneumoniae (MO) Hemolysin (hlyA) Codon optimization Hemolytic activity |
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