| 人Irisin基因的克隆、原核表达及重组蛋白的纯化 |
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| 引用本文： | 何赛,李洁,郁建锋,顾志良.人Irisin基因的克隆、原核表达及重组蛋白的纯化[J].农业生物技术学报,2016(10):1522-1528. |
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| 作者姓名： | 何赛 李洁 郁建锋 顾志良 |
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| 作者单位： | 1. 常熟理工学院生物与食品工程学院,常熟215500;中国矿业大学化工学院,徐州221000;2. 常熟理工学院生物与食品工程学院,常熟,215500 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.31472091)和江苏省自然科学基金(No.BK20151257) |
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| 摘 要： | 鸢尾素(Irisin)是新发现的一种肌肉因子,其前体是Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白5(fibronectin typeⅢdomain-containing protein 5,FNDCS).为实现人(Homo sapiens) Irisin的原核表达,通过反转录PCR得到人肌肉组织总RNA的cDNA,并以特异性引物扩增得到人FNDC5基因的cDNA序列.以特异性引物扩增将人Irisin基因序列引入NdeⅠ和Xho Ⅰ酶切位点,经双酶切后插入原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒并转化大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta (DE3) pLysS.通过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl dulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)检测,用镍柱纯化目的蛋白,并用Western blot方法鉴定.DNA序列分析结果显示,克隆的人Irisin基因序列和NCBI公布的序列一致,并成功构建了pET-30a-Irisin重组表达载体;SDS-PAGE电泳检测和Western blot结果表明,表达蛋白分子量约为14kD,与预期大小一致;实现了人Irisin的可溶性表达,得到了较高纯度的目的蛋白,为进一步研究人Irisin蛋白的结构、功能及应用提供了理论依据.
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| 关 键 词： | 鸢尾素(Irisin) 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 |
Cloning,Prokaryotic Expression of Human(Homo sapiens) Irisin Gene and Purification of Recombinant Protein |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Irisin Gene clone Prokaryotic expression Protein purification |
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