| 利用CRISPR/Cas9系统高效敲除斑马鱼lncRNA基因启动子区 |
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| 引用本文： | 田净净,刘洋洋,杨哲,刘菲菲,杨祎擎,韩笑,耿拓宇,高波,宋成义.利用CRISPR/Cas9系统高效敲除斑马鱼lncRNA基因启动子区[J].农业生物技术学报,2016(5):649-656. |
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| 作者姓名： | 田净净 刘洋洋 杨哲 刘菲菲 杨祎擎 韩笑 耿拓宇 高波 宋成义 |
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| 作者单位： | 1. 扬州大学表观遗传学与表观基因组学研究所,扬州225009;扬州大学动物科学与技术学院,扬州225009;2. 扬州大学表观遗传学与表观基因组学研究所,扬州,225009;3. 扬州大学动物科学与技术学院,扬州,225009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.81171965、No.81372237和No.91540117) |
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| 摘 要： | 斑马鱼(Danio rerio)长非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)基因Nondret002679与人(Homo sapiens)肿瘤相关基因间长非编码RNA682基因LNC-PHOX2B-2具有同源序列.本研究以斑马鱼为模型,利用成簇规律间隔短回文重复序列/成簇规律间隔短回文重复序列关联蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)系统,敲除预测的Nondret002679基因启动子区以沉默Nondret0026 79基因的表达,研究IncRNA基因Nondret0026 79在斑马鱼中的调控功能.首先利用启动子区上下游序列设计靶向不同位点的向导RNA(guide RNA) gR1、gR2、gR3、gR4、gR5和gR6.人工合成gRNA转录模板,体外转录为gRNA,与Cas9 mRNA一起显微注射到斑马鱼卵中.PCR鉴定28尾2月龄斑马鱼发现,11尾发生敲除,敲除率为39％.繁殖启动子区敲除的杂合鱼,获得33尾F1代,经鉴定有6尾F1斑马鱼启动子区缺失,其中3尾缺失是在两条同源染色体上.该初步研究表明,CRISPR/Cas9系统可高效敲除lncRNA基因的启动子区,并且这种敲除可以遗传至下一代,为研究lncRNA功能提供了一个有效的基因编辑工具.
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 向导RNA (gRNA) 长非编码RNA (lncRNA) 显微注射 Nondret002679 斑马鱼 |
Efficient Knockout of lncRNA Promoter Region by CRISPR/Cas9 System in Zebrafish (Danio rerio) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CRISPR/Cas9 Guide RNA (gRNA) Long non-coding RNA (lncRNA) Microinjection Nondret002679 Zebrafish |
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