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| Overlap-PCR克隆秦川牛HCRTR1基因及其在大肠杆菌中的表达 | |
| 引用本文： | 张丽,张良志,张爱玲,陈宏,张春雷,张琴.Overlap-PCR克隆秦川牛HCRTR1基因及其在大肠杆菌中的表达[J].农业生物技术学报,2008,16(4). |
| 作者姓名： | 张丽 张良志 张爱玲 陈宏 张春雷 张琴 |
| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌,712100;广东海洋大学农学院,湛江,524025 2. 西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌,712100 3. 西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌,712100;贵州大学生命科学学院,贵阳,550025 4. 西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌,712100;徐州师范大学细胞与分子生物学研究所,徐州,221116 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，国家自然科学基金，国家支撑计划，西北农林科技大学拔尖人支持计划 |
| 摘 要： | 通过Overlap-PCR方法克隆了秦川牛(Bos tarus)的增食欲素受体1(HCRTR1)基因编码区全长,获得1 278 bp编码区全长序列(GenBank登录号:DQ874350),将其克隆至pMD-18T载体上,经测序表明获得的cDNA序列与GenBank公布的序列同源性均为98%.阳性质粒经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后,将目的片段定向克隆到pET32a( )表达载体上,转化B121(DE3)感受态大肠杆菌(Escherichia coli),经鉴定正确后,用IPTG诱导目的蛋白的表达.SDS-PAGE表明,秦川牛HCRTR1基因在大肠杆菌中没有表达,进一步生物信息学分析表明,HCRTR1基因的表达产物为具有7个跨膜螺旋的G蛋白偶联受体,复杂的蛋白质结构使得其不能在原核表达系统中获得表达. |
| 关 键 词： | 重组PCR 秦川牛 增食欲素受体1(HCRTR1)基因 原核表达 |
Cloning Of HCRTR1 Gene by Overlap-PCR from Qinchuan Cattle and Its Expression in Escherichia coli |
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| ZHANG Li,ZHANG Liang-zhi,ZHANG Ai-ling,CHEN Hong,ZHANG Chun-lei,ZHANG Qin.Cloning Of HCRTR1 Gene by Overlap-PCR from Qinchuan Cattle and Its Expression in Escherichia coli[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2008,16(4). | |
| Authors: | ZHANG Li ZHANG Liang-zhi ZHANG Ai-ling CHEN Hong ZHANG Chun-lei ZHANG Qin |
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