| 弹性蛋白酶基因(PAE)的克隆及在毕赤酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 谷新晰,许文涛,黄昆仑,罗云波,林希谨,陈卓君,田洪涛.弹性蛋白酶基因(PAE)的克隆及在毕赤酵母中的表达[J].农业生物技术学报,2009,17(6). |
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| 作者姓名： | 谷新晰 许文涛 黄昆仑 罗云波 林希谨 陈卓君 田洪涛 |
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| 作者单位： | 谷新晰(河北农业大学食品科技学院,保定,071001);许文涛,黄昆仑,罗云波,林希谨,陈卓君(中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083);田洪涛(河北农业大学食品科技学院,保定,071001;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083) |
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| 基金项目： | 国家高技术研究与发展计划(863)项目，农业部"948"项目 |
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| 摘 要： | 以1株产弹性蛋白酶的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)基因组DNA为模板,经PCR扩增得到的铜绿假单胞菌弹性蛋白酶(P.acruginosa elastase,PAE)基因,与GenBank中的序列对比发现同源性为99%.成功地构建了重组表达载体pPIC3.5K/PAE,莺组质粒Sac Ⅰ线性化后转化毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株KM71中,通过PCR和表型鉴定表明,PAE基因已经整合到毕赤酵母染色体上.经大量筛选获得48株含高拷贝的重组毕赤酵母转化子.在甲醇诱导下,经过毕赤酵母高密度发酵进行PAE的表达,经SDS-PAGE分析.结果表明,在培养基上清中含有一明显特异性蛋白条带,大小为34kD.活性检测结果,酶活为1 060 U/mL,是出发菌株的26倍.
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| 关 键 词： | 铜绿假单胞菌 弹性蛋白酶 基因克隆 载体构建 毕赤酵母 |
Cloning of Pseudomonas aeruginosa Elastase Gene(PAE)and Its Expression in Pichia pastoris |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pseudomonas aeruginosa elastase gene cloning vector construction Pichia pastoris |
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