| 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP3-GP5-M融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 王凡,刘建斌,吕志慧,刘学荣,牟克斌.猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP3-GP5-M融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达[J].农业生物技术学报,2012,20(10):1201-1206. |
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| 作者姓名： | 王凡 刘建斌 吕志慧 刘学荣 牟克斌 |
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| 作者单位： | 1. 中农威特生物科技股份有限公司,兰州,730046
2. 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,兰州,730050 |
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| 摘 要： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种严重危害养猪业发展的传染病,为了PRRSV GP3-GP5(N-糖基化蛋白)-M(膜蛋白)融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达及其免疫原性,本研究利用脂质体法将构建好的真核重组表达质粒pcDNA3.1-ORF3-ORF5-ORF6转染猪肾细胞(PK-15细胞),经G418(600 μg/mL)筛选(72 h)获得稳定表达PRRSV GP3-GP5-M融合蛋白的稳定细胞株.以RT-PCR分析目的基因转录；间接免疫荧光检测融合蛋白表达；Western blot和小鼠(Mus musculus)免疫试验检测融合蛋白免疫原性.结果表明,RT-PCR检测到3种目的基因的转录；间接免疫荧光检测到融合蛋白得以表达,Western blot检测到融合蛋白可与阳性猪血清发生特异性反应.小鼠免疫试验二免后S/P=样本/阳性对照的比率,达到1.80(S/P＞0.4为阳性),并且至少可以持续1个月.本研究成功实现了PRRSV GP3-GP5-M 融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达,证实PRRSV GP3-GP5-M融合蛋白具有良好的免疫原性,为PRRSV 多基因核酸疫苗研制提供了基础资料.
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP3-GP5-M 蛋白表达 |
Expression of Fusion Protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) GP3-GP5-M in PK-15 Cells |
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| WANG Fan
,
LIU Jian-Bin
,
LV Zhi-Hui
,
LIU Xue-Rong
,
MU Ke-Bin.Expression of Fusion Protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) GP3-GP5-M in PK-15 Cells[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2012,20(10):1201-1206. |
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| Authors: | WANG Fan LIU Jian-Bin LV Zhi-Hui LIU Xue-Rong MU Ke-Bin |
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| Institution: | 1* 1 China Agricultural Veterinarian Biology Science and Technology Co., Ltd, Lanzhou 730046, China; 2 Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730050, China |
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