| L.reuteri亚油酸异构酶基因在大肠杆菌中的表达及活性检测 |
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| 引用本文： | 张艳禾；张兰威；胡,森；步志高.L.reuteri亚油酸异构酶基因在大肠杆菌中的表达及活性检测[J].农业生物技术学报,2007,15(1):147-152. |
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| 作者姓名： | 张艳禾；张兰威；胡 森；步志高 |
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| 作者单位： | 东北农业大学食品科学学院 |
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| 摘 要： | 以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21为表达宿主，重组表达亚油酸异构酶(gLI)。根据GenBank上发表的gLI基因序列，设计并合成一对引物，从L.reuteriPYR8基因组中，PCR扩增出去除5’端42bp信号肽的gLI基因片断，将其克隆入pMD－18－T载体中，序列测定后将gLI基因亚克隆到表达载体pET30a中（pET30a-gLI），将其转化大肠杆菌BL21(DE3)， 在1mmol/L IPTG 30℃条件下诱导表达，大肠杆菌裂解物经SDS-PAGE分析，出现了一新分子量约67kD的蛋白带，与预期目的蛋白分子量相符。生物学活性鉴定表明：经稀释、透析复性，获得的重组gLI在反应缓冲液可以将亚油酸（LA）转化为共轭亚油酸（CLA），30℃ pH7.3的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液，酶活最高为1377U。为进一步体外研究gLI的生物学活性、酶作用机制奠定了基础。
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| 收稿时间： | 2006-4-10 |
| 修稿时间： | 2006-8-28 |
Overexpression and Identification of Bioactivity of L.reurei linoleite isomerase in Escherichia coli |
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