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| 转基因植物中CaMV35S和tNOS元件的4种定性PCR检测方法的比较 | |
| 引用本文： | 徐俊锋,王鹏飞,李玥莹,汪小福,陈笑芸,彭城,缪青梅.转基因植物中CaMV35S和tNOS元件的4种定性PCR检测方法的比较[J].农业生物技术学报,2015,23(3):397-407. |
| 作者姓名： | 徐俊锋 王鹏飞 李玥莹 汪小福 陈笑芸 彭城 缪青梅 |
| 作者单位： | 1. 浙江省农业科学院,杭州,310021 2. 浙江省农业科学院,杭州310021;沈阳师范大学化学与生命科学学院,沈阳110034 3. 沈阳师范大学化学与生命科学学院,沈阳,110034 |
| 基金项目： | 浙江省公益项目，浙江省农业科学院和中国科学院合作项目 |
| 摘 要： | 花椰菜花叶病毒35S启动子(promoter of Cauliflower mosaicvirus 35S,CaMV35S)和胭脂碱合成酶基因终止子(terminator of nopaline synthase gene,tNOS)是转基因产品筛选检测中的首选参数,日常检测中发现,个别标准中用于筛选检测这两种元件的引物存在非特异性扩增和灵敏度差的问题。本研究收集了国内外标准中常用的扩增片段分别为195、165、147和123 bp的CaMV35S和扩增片段分别为180、172、165和118 bp的tNOS各4对引物,应用普通PCR和实时荧光(Real-time)PCR方法,对8对引物的特异性、灵敏度及在加工品中的扩增性进行了测试和适用性评价。结果表明,CaMV35S 165和147 bp引物具有很好的特异性,灵敏度高,在不同的加工品中也表现出强的检测能力,筛选检测效果最佳;195bp引物扩增性稍差,且经常出现非特异性扩增;123bp引物较其他引物扩增弱且扩增不稳定。tNOS 172和165bp引物具有很好的特异性,灵敏度高,在不同的加工品中也表现出强的检测能力,筛选检测效果最佳;180bp引物扩增性较差,且易出现非特异扩增;118bp引物较其他引物扩增弱且扩增不稳定。本研究通过普通PCR和实时荧光(Real-time)PCR对不同国标中出现的引物进行适用性评价,为转基因产品的检测监管提供可靠技术依据。 |
| 关 键 词： | 转基因 筛选检测 CaMV35S tNOS 灵敏度 |
Comparison of Four Qualitative PCR-based Detection Methords of CaMV35S and tNOS Elements in Transgenic Plants |
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| XU Jun-Feng,WANG Peng-Fei,LI Yue-Ying,WANG Xiao-Fu,CHEN Xiao-Yun,PENG Cheng,MIAO Qing-Mei.Comparison of Four Qualitative PCR-based Detection Methords of CaMV35S and tNOS Elements in Transgenic Plants[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2015,23(3):397-407. | |
| Authors: | XU Jun-Feng WANG Peng-Fei LI Yue-Ying WANG Xiao-Fu CHEN Xiao-Yun PENG Cheng MIAO Qing-Mei |
| Institution: | XU Jun-Feng;WANG Peng-Fei;LI Yue-Ying;WANG Xiao-Fu;CHEN Xiao-Yun;PENG Cheng;MIAO Qing-Mei;Zhejiang Academy of Agricultural Sciences;College of Chemistry and Life Science,Shenyang Normal University; |
| Abstract: | |
| Keywords: | Transgene Screening detection CaMV35S tNOS Sensitivity |
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