| 猪干扰素γcDNA的分子克隆与在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 吴文学,夏春,汪明,蒋金书.猪干扰素γcDNA的分子克隆与在大肠杆菌中的表达[J].农业生物技术学报,2002,10(3):255-258. |
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| 作者姓名： | 吴文学 夏春 汪明 蒋金书 |
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| 作者单位： | 中国农业大学动物医学院,北京,100094 |
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| 摘 要： | 采用RT-PCR技术从猪脾淋巴细胞总RNA中扩增出猪干扰素γcDNA(SwIFN-γ2).SwIFN-γ2与已报道的猪干扰素γ序列基本一致,仅在462位核苷酸处发生了点变异.在SwIFN-γ2成熟蛋白基因两端分别合成含SphⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到pQE30表达载体,转化宿主菌SG13009(pREP4),经IPTG诱导表达了N'端含6个组氨酸的重组猪干扰素γ(6His-rSwIFNγ2).重组干扰素的表达量占总菌体蛋白的33.5%.采用Ni-NTA金属螯合亲和层析纯化6His-rSwIFNγ2,其纯度达90%以上,经8 mol/L尿素溶液变性、透析复性后,其抗滤泡性口炎病毒比活性为8×103～1.6×104U/mg.
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| 关 键 词： | 猪 干扰素γ cDNA 分子克隆 大肠杆菌 表达 |
| 修稿时间： | 2001年11月19 |
Molecular Cloning of Swine Interferon Gamma cDNA and Its Expression in E.coli |
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