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Overlap PCR克隆黄牛脂肪特异性磷脂酶A2基因(AdPLA)及其原核表达
引用本文:朱金龙,孙晓梅,张亚,蓝贤勇,雷初朝,陈宏.Overlap PCR克隆黄牛脂肪特异性磷脂酶A2基因(AdPLA)及其原核表达[J].农业生物技术学报,2011,19(6).
作者姓名:朱金龙  孙晓梅  张亚  蓝贤勇  雷初朝  陈宏
作者单位:西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌712100
基金项目:国家自然科学基金(No.30972080); 国家支撑计划(No.2008ADB2B03-19); 国家高技术研究发展计划(863)(No.2008AA101010); 国家转基因重大专项(No.2009ZX08009-157B,2008ZX08007-002,2009ZX08007-005B-07); 农业部现代肉牛产业技术体系专项(No.Nycytx-38)共同资助
摘    要:脂肪特异性磷脂酶A2基因(adipose-specific phospholipase A2,A dPLA)在脂肪组织甘油三酯水解过程中发挥着重要的调节作用,为了构建黄牛AdPLA基因原核表达系统,本研究通过Overlap PCR方法从黄牛(Bos taurus)基因组DNA中得到了AdPLA基因编码区全长,将其克隆到pGM-T载体上,阳性克隆经测序表明,与NCBI公布的序列(GenBank No.NM_001075280)完全一致.阳性质粒经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后,将其定向重组到pET28a(+)原核表达载体上,转化感受态大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)中,用IPTG诱导融合蛋白表达.SDS-PAGE电泳表明,融合蛋白His-AdPLA在大肠杆菌中表达,证明成功构建了AdPLA基因原核表达系统,为进一步研究黄牛AdPLA基因的功能和AdPLA蛋白产品开发提供了依据.

关 键 词:黄牛  脂肪特异性磷脂酶A2基因(AdPLA)  原核表达  Overlap  PCR

Cloning of Cattle Adipose-specific phospholipase A2 Gene(AdPLA) by Overlap PCR and Its Prokaryotic Expression
Zhu Jinlong , Sun Xiaomei , Zhang Ya , Lan Xianyong , Lei Chuzhao , Chen Hong.Cloning of Cattle Adipose-specific phospholipase A2 Gene(AdPLA) by Overlap PCR and Its Prokaryotic Expression[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2011,19(6).
Authors:Zhu Jinlong  Sun Xiaomei  Zhang Ya  Lan Xianyong  Lei Chuzhao  Chen Hong
Institution:Zhu Jinlong Sun Xiaomei Zhang Ya Lan Xianyong Lei Chuzhao Chen Hong* College of Animal Science and Technology,Northwest Agricutural and Forestry University,Shaanxi Key Laboratory of Molecular Biology for Agriculture,Yangling 712100,China
Abstract:
Keywords:Cattle  Adipose-specific phospholipase A2(AdPLA)  Prokaryotic expression  Overlap PCR  
本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录!
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