| 潮霉素磷酸转移酶（hpt）基因的原核表达、蛋白纯化及其抗体制备 |
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| 引用本文： | 许文涛,芦云,罗云波,元延芳,黄昆仑.潮霉素磷酸转移酶（hpt）基因的原核表达、蛋白纯化及其抗体制备[J].农业生物技术学报,2008,16(4). |
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| 作者姓名： | 许文涛 芦云 罗云波 元延芳 黄昆仑 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083;农业部转基因产品检验监督测试中心,北京,100083
2. 农业部转基因产品检验监督测试中心,北京,100083 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，国家引进国际先进农业科学技术计划(948计划) |
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| 摘 要： | 从转基因玉米(Zea mays)基因组上成功地克隆出潮霉素磷酸转移酶基因(hpt),通过BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切将hpt基因与pET30a进行粘性末端连接,成功构建了pET30a-hpt质粒,并转化到大肠杆菌(Eschenchia coli)BL21中进行蛋白表达.在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,pET30a-hpt融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以可溶性蛋白的形式高效表达了HPT蛋白,并通过金属鏊和层析纯化了目的蛋白.用肠激酶切除了融合蛋白的融合部分之后再一次通过金属鏊和层析,经过透析后获得了HPT纯品,并且使用纯化的HPT蛋白免疫兔制备了特异性强、灵敏度高的多克隆抗体.
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| 关 键 词： | 潮霉素磷酸转移酶(hpt)基因 表达纯化 多克隆抗体 |
Expression of Hygromycin-B-phosphotransferase(hpt) Gene in Eschedchia coli, Purification of HPT Protein and Preparation of Its Polyclonal Antibodies |
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| XU Wen-tao,LU Yun,LUO Yun-bo,YUAN Yan-fang,HUANG Kun-lun.Expression of Hygromycin-B-phosphotransferase(hpt) Gene in Eschedchia coli, Purification of HPT Protein and Preparation of Its Polyclonal Antibodies[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2008,16(4). |
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| Authors: | XU Wen-tao LU Yun LUO Yun-bo YUAN Yan-fang HUANG Kun-lun |
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