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| 黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)的克隆及其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达 | |
| 引用本文： | 黄妙容,阳建辉,刘德武,黄晓灵,蔡更元,吴珍芳.黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)的克隆及其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达[J].农业生物技术学报,2012,20(12):1449-1456. |
| 作者姓名： | 黄妙容 阳建辉 刘德武 黄晓灵 蔡更元 吴珍芳 |
| 作者单位： | 1. 华南农业大学动物科学学院,广州510642;肇庆大华农生物药品有限公司,广东省兽用生物制品技术研究与应用企业重点实验室,肇庆526238 2. 岳阳职业技术学院,岳阳,414000 3. 华南农业大学动物科学学院,广州,510642 4. 广东省农业科学院畜牧研究所,广州,510642 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)项目，广东省自热科学基金项目，国家科技重大专项 |
| 摘 要： | β-葡萄糖苷酶是纤维素酶系三大成员之一,被认为是纤维素糖化的限速酶。本研究克隆黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1),并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中进行表达分析。以GenBank上黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)序列为模板,设计特异性引物,从黑曲霉(Asperjillus niger)基因组DNA中扩增目的片段,通过SOE-PCR的方法将猪腮腺分泌蛋白信号肽序列sp和bgl1相连,成功构建分泌型真核表达载体pc6-sp-bgl1,利用脂质体介导法瞬时转染哺乳动物CHO细胞,通过RT-PCR和Western blot检测,最后通过DNS(dinitrosalicylic acid)法测定表达产物酶学活性。PCR扩增得到的目的序列与文献报道序列的相似性为91%,预测的蛋白氨基酸序列相似性为99%。RT-PCR和Western blot检测证明,外源基因bgl1在CHO细胞中得到表达;分泌到细胞培养上清中的重组蛋白对水杨素的水解活性为1.74U/mL,说明重组蛋白具有β-葡萄糖苷酶活性。本研究克隆得到黑曲霉bgl1基因并在哺乳动物CHO细胞中进行表达,为β-葡萄糖苷酶在单胃动物中的利用提供了基础研究资料。 |
| 关 键 词： | 黑曲霉 β-葡萄糖苷酶BGL1 克隆表达 CHO细胞 酶活测定 |
Cloning of a β-glucosidase Gene (bgl1) from Asperjillus niger and Expression in Chinese Hamster Ovary (CHO) Cells |
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| HUANG Miao-Rong , YANG Jian-Hui , LIU De-Wu , HUANG Xiao-Ling , CAI Geng-Yuan , WU Zhen-Fang.Cloning of a β-glucosidase Gene (bgl1) from Asperjillus niger and Expression in Chinese Hamster Ovary (CHO) Cells[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2012,20(12):1449-1456. | |
| Authors: | HUANG Miao-Rong YANG Jian-Hui LIU De-Wu HUANG Xiao-Ling CAI Geng-Yuan WU Zhen-Fang |
| Institution: | 1* 1 College of Animal Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China; 2 Yueyang Vocational Technical College, Yueyang 414000, China; 3 Institute of Animal Science, Guangdong Academy of Agricultural Sciences, Guangzhou 510642, China; 4 Key Laboratory of Biotechnology R&D of Veterinary Biology Products of Guangdong Enterprise, Zhaoqing Dahuanong Biology Medicine Co., Ltd, Zhaoqing 526238, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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