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| 水稻、菠菜甜菜碱醛脱氢酶(BADH)重组蛋白表达及酶活性分析 | |
| 引用本文： | 罗笛,牛向丽,余进德,刘永胜.水稻、菠菜甜菜碱醛脱氢酶(BADH)重组蛋白表达及酶活性分析[J].农业生物技术学报,2012,20(12):1390-1397. |
| 作者姓名： | 罗笛 牛向丽 余进德 刘永胜 |
| 作者单位： | 1. 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,成都,610064 2. 合肥工业大学生物与食品工程学院,合肥,230009 3. 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,成都610064;合肥工业大学生物与食品工程学院,合肥230009 |
| 基金项目： | 国家自然基金面上项目，国家杰出青年科学基金项目 |
| 摘 要： | 本研究目的是通过基因克隆、原核表达和蛋白纯化技术获得水稻(Oryza sativa subs.japonica)、菠菜(Spinacia oleracea)甜菜碱醛脱氢酶基因(OsBADH和SpBADH)的融合蛋白,体外测定两者的醛脱氢酶活性,说明水稻存在OsBADH且具有醛脱氢酶功能。通过RT-PCR成功克隆了OsBADH和SpBADH基因的全长序列,二者氨基酸序列同源性为70.8%。OsBADH和SpBADH的重组质粒均可在大肠杆菌(Escherichia coli)菌株BL21(DE3)中表达,SDS-PAGE分析表明,经0.4mmol/LIPTG诱导的融合蛋白条带约70kD。两者的表达产物经TALON金属螯合树脂纯化后进行酶活测定,结果显示都具有甜菜碱醛脱氢酶活性。OsBADH的比活力为74.87nmol/min/mg,对照SpBADH比活力为86.84nmol/min/mg,表明OsBADH能够有效行使醛脱氢酶功能,而高效液相色谱法未在水稻叶片中检测出甜菜碱。研究结果提示,水稻可能并非由于BADH自身不具有酶活而不积累甘氨酸甜菜碱,该研究为进一步探讨水稻中甜菜碱合成的分子机制提供了研究基础。 |
| 关 键 词： | 水稻 菠菜 甜菜碱醛脱氢酶 原核表达 酶活测定 |
Recombination and Activity Assay of Betaine Aldehyde Dehydrogenase (BADH) Protein of Rice (Oryza sativa subs.japonica) and Spinach (Spinacia oleracea) |
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| LUO Di , NIU Xiang-Li , YU Jin-De , LIU Yong-Sheng.Recombination and Activity Assay of Betaine Aldehyde Dehydrogenase (BADH) Protein of Rice (Oryza sativa subs.japonica) and Spinach (Spinacia oleracea)[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2012,20(12):1390-1397. | |
| Authors: | LUO Di NIU Xiang-Li YU Jin-De LIU Yong-Sheng |
| Institution: | 1, 2* 1 Key Laboratory of Bio-resources and Eco-environment, Ministry of Education, College of Life Sciences, Sichuan University, Chengdu 610064, China; 2 School of Biotechnology and Food Engineering, Hefei University of Technology, Hefei 230009, China |
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| Keywords: | |
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