| 泡桐MSAP体系建立及引物筛选 |
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| 引用本文： | 曹喜兵,赵改丽,范国强.泡桐MSAP体系建立及引物筛选[J].河南农业大学学报,2012,46(5):535-541. |
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| 作者姓名： | 曹喜兵 赵改丽 范国强 |
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| 作者单位： | 河南农业大学泡桐研究所,河南郑州,450002 |
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| 摘 要： | 以豫杂一号泡桐组培苗为材料,通过对影响MSAP反应体系各主要因素的优化,建立了适于泡桐MSAP分析的反应体系.结果表明,最佳酶切体系(25μL)包含300 ng模板DNA,16 U的EcoR I和10 U的HapⅡ(MspI),各双酶切8 h后,80℃失活20 min;最佳连接体系(25μL)是酶切产物20μL,0.16μmol.L-1EcoR I接头,1.6μmol.L-1HapⅡ(MspI)接头,2.5μL 10×T4Buffer,2 U T4连接酶,22℃连接18 h;最佳预扩反应体系(20μL)是5μL稀释10倍的连接产物,100μmol.L-1dNTP,0.5 U Taq酶,EcoR I和HapⅡ(MspI)预扩引物各0.25μmol.L-1,2.5μL 10×PCR Buffer.最佳选择性扩增反应体系(20μL)为5μL稀释30倍预扩增产物,100μmol.L-1 dNTP,0.5 U Taq酶,EcoR I和HapⅡ(MspI)选扩引物各0.3μmol.L-1,2.5μL 10×PCRBuffer.最后,利用优化的体系,筛选出了96对适宜于泡桐MSAP分析的引物.
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| 关 键 词： | 泡桐 MSAP 反应体系 引物筛选 |
Establishment of Paulownia MSAP reaction systems and primers screening |
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| CAO Xi-bing
,
ZHAO Gai-li
,
FAN Guo-qiang.Establishment of Paulownia MSAP reaction systems and primers screening[J].Journal of Henan Agricultural University,2012,46(5):535-541. |
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| Authors: | CAO Xi-bing ZHAO Gai-li FAN Guo-qiang |
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| Institution: | (Institute of Paulownia,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,China) |
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