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| 猪MAVS基因原核表达载体的构建及其多克隆抗体的制备 | |
| 作者单位： | ;1.广西大学动物科学技术学院动物传染病研究室;2.广西大学亚热带农业生物资源保护利用国家重点实验室 |
| 摘 要： | 通过RT-PCR从PK-15细胞系中扩增克隆MAVS(mitochondrial antiviral signaling protein)基因,构建原核表达载体p ET-MAVS220,转化感受态细胞Rosetta(DE3),利用IPTG诱导表达,重组MAVS经纯化后免疫4周龄昆明系小鼠制备抗线粒体抗病病毒信号蛋白(MAVS)多克隆抗体。诱导表达的最佳条件为IPTG 0.05 mmol/L,37℃诱导6 h,重组MAVS以可溶性蛋白和包涵体两种形式表达。应用该重组蛋白免疫小鼠获得的抗MAVS多克隆抗体与纯化的重组MAVS蛋白反应效价可达1∶16 000;该抗体与Poly(I∶C)刺激PK-15细胞产生的MAVS及与转染了重组MAVS基因真核表达载体pcDNA3.0-MAVS的BHK-21细胞表达的MAVS蛋白发生特异性反应,效价可达1∶1 000,特异性良好。 |
| 关 键 词： | 猪MAVS 原核表达 多克隆抗体 |
Antigenic specificity ofswine MAVS by prokaryotic expression and its preparation of polyclonal antibody |
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| Keywords: | |