鹅MyoG基因启动子活性及转录调控元件分析

旨在分析鹅MyoG基因启动子活性区域和转录因子，探究该基因的转录调控机制。本研究首先通过PCR扩增泰州鹅MyoG基因5'侧翼区序列1 245 bp并对其进行测序和生物信息学分析，其次，构建4个不同缺失片段的双荧光素酶报告载体，转染C2C12细胞系。进一步利用在线软件预测核心启动子区关键转录因子，对转录因子结合位点HNF4（-521～-503 bp）、USF （-379～-370 bp）和E2（-296～-281 bp）进行定点突变并构建突变报告基因载体，在C2C12细胞系内初步鉴定MyoG基因核心转录调控因子。最后，采集70日龄泰州鹅胸肌、腿肌、心、肝、脾、肺、肾和下丘脑组织样，利用荧光定量PCR检测MyoG基因和核心转录调控因子的组织表达谱。结果表明，扩增得到的鹅MyoG基因5'侧翼区序列包含启动子元件；利用双荧光素酶报告载体检测到鹅MyoG基因启动子区-624～-154 bp区域存在关键顺式调控元件；结合定点突变技术初步鉴定USF是鹅MyoG基因核心转录调控元件。组织表达谱研究进一步表明，MyoG和USF基因在鹅8个不同组织中均有表达，且在胸肌、腿肌和心组织中共同高表达（P<0.01）。鹅MyoG基因5'侧翼区具有启动子转录活性，-624～＋37 bp是核心启动子区，USF是MyoG核心转录调控因子。试验结果为探究MyoG基因在鹅肌肉发育过程的调控机制提供理论依据。