布鲁氏菌IV型分泌系统蛋白BMEII0735基因的原核表达

【目的】构建布鲁氏菌IV型分泌系统蛋白BMEII 0735基因的原核表达载体,进行表达、鉴定。【方法】本研究从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)043株的基因组中克隆BMEII 0735基因片段,亚克隆到pMD 19-T载体中,并测序,克隆至表达载体pET-28 a,构建重组质粒pET-28a-BMEII 0735,利用大肠杆菌进行表达,并进行Western-Blot检测。【结果】成功构建了pET-28a-BMEII 0735原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了BMEII 0735基因。经过SDS-PAGE检测,重组蛋白的分子量大约是64 KDa。经Western-Blot检测, BMEII 0735蛋白可与布鲁氏菌的阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。【结论】本实验成功表达了布鲁氏菌IV型分泌系统蛋白BMEII 0735基因,并成功获得了BMEII 0735蛋白。BMEII 0735蛋白具有与布鲁氏菌自身蛋白相同的抗原性,为进一步研究布鲁氏菌病的鉴别诊断以及其免疫原性和保护性奠定了基础。