| 草鱼呼肠孤病毒Taq Man real-time PCR检测方法的建立 |
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| 作者姓名： | 周勇 曾令兵 范玉顶 徐进 马杰 罗晓松 肖艺 |
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| 作者单位： | 1. 中国水产科学研究院长江水产研究所,湖北荆州,434000
2. 中国水产科学研究院长江水产研究所,湖北荆州434000;华中农业大学水产学院,湖北武汉430071
3. 华中农业大学水产学院,湖北武汉,430071 |
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| 基金项目： | 国家现代农业产业技术体系建设专项资金资助(nycytx-49-16);农业部公益性行业科研专项(200803013) |
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| 摘 要： | 利用RT-PCR技术扩增出草鱼呼肠孤病毒(GCRV)VP6蛋白编码区长度为1 250 bp的片段,克隆到pEGFP-N1载体上,构建重组质粒pEGFP-N1-VP6。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pEGFP-N1-VP6重组质粒,作为标准模板进行TaqMan real-time PCR扩增,制作标准曲线,建立了草鱼呼肠孤病毒的荧光定量PCR检测方法。检测结果显示,标准曲线的相关系数(R2)达到0.998 09,斜率为-3.373;对初始模板定量检测的范围为1×101～1×106 copies/μL;特异性试验结果表明,该方法可特异性地检测出草鱼呼肠孤病毒,而对鲤春病毒血症病毒(SVCV)、传染性造血器官坏死症病毒(IHNV)无检测信号。本研究建立的草鱼呼肠孤病毒Taq Man real-time PCR方法灵敏度高、特异性强,可进行定量分析,对草鱼出血病快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。
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| 关 键 词： | 草鱼呼肠孤病毒 VP6蛋白编码基因 Taq Man real-time PCR 检测 |
| 收稿时间： | 2011-01-23 |
| 修稿时间： | 2011-02-08 |
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