降钙素基因相关肽在牦牛附睾中的定位与表达

【目的】分析降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide,CGRP）在牦牛附睾中的转录水平及蛋白分布特点，探究其对精子运输及成熟的功能。【方法】采集6头3~4岁健康成年牦牛的附睾，将其解剖为头、体、尾三部分，应用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、Western blotting分别检测CGRP mRNA和蛋白在附睾的头、体、尾中的表达水平；采用H.E染色法分析附睾组织结构特点；采用免疫组化和免疫荧光技术分析附睾各部分CGRP的分布及表达情况。【结果】RT-qPCR结果表明，CGRP在牦牛附睾头的相对表达量显著高于附睾体和附睾尾（P＜0.05），附睾尾表达量最低（P＜0.05）；Western blotting检测结果表明，CGRP蛋白水平在附睾尾中的表达水平显著高于附睾头和附睾体（P＜0.05）。显微镜下观察表明，牦牛附睾组织纤毛长度从头部至尾部逐渐降低，差异显著；附睾头间质组织的间质平滑肌层厚度显著低于附睾体和附睾尾（P＜0.05）；基细胞和晕细胞在附睾尾分布显著，上皮厚度亦在附睾尾显著降低。免疫组化及免疫荧光分析发现，CGRP主要分布于附睾上皮、基底膜及附睾间质小血管，附睾上皮晕细胞的表达强度最高。【结论】CGRP主要分布于牦牛附睾上皮和间质小血管，提示CGRP对牦牛附睾间质小血管的收缩发挥调节作用。牦牛附睾尾晕细胞数量最多，晕细胞中CGRP的高强度表达提示其可能参与附睾尾的免疫调节。