| 漆树TvGST7基因克隆及其功能分析 |
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| 引用本文： | 何学高,赵爱国,谢冬冬,等.漆树TvGST7基因克隆及其功能分析[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2020,48(6):39-51. |
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| 作者姓名： | 何学高 赵爱国 谢冬冬 等 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 林学院,西北农林科技大学 林学院,西北农林科技大学 林学院 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目“漆树丰产经营与精细产品开发技术研究”（2017YFD0600705） |
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| 摘 要： | 【目的】克隆漆树(Toxicodendron vernicifluum(Stokes) F. A. Barkl.)叶片中的谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)基因并分析其结构特征,明确该基因编码蛋白的酶活性及该基因的抗逆性,为其功能研究提供理论依据。【方法】根据已有的漆树叶片转录组数据,利用RT-PCR克隆漆树GST基因,应用生物学网站对其所编码蛋白的理化性质进行分析,并构建系统进化树和三维结构模型;利用原核表达系统和Ni-NTA亲和层析技术表达、纯化漆树GST重组蛋白,并利用不同底物测定重组蛋白的酶活性;将原核表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3),验证该基因对低温、高温、高盐、高渗透压等非生物逆境胁迫的耐受性。【结果】获得了漆树谷胱甘肽S-转移酶基因TvGST7(GenBank登录号为MK956145)的完整编码序列,开放阅读框为711 bp,编码236个氨基酸,分子质量为27.17 ku,理论等电点为5.25;进化树分析和三维结构模拟表明,TvGST7蛋白属于Lambda(L)亚家族。酶活性测定结果显示,重组蛋白TvGST7具有巯基转移酶活性;胁迫试验表明,TvGST7的表达能增强大肠杆菌对低温、高温、高盐、高渗透压等非生物胁迫的抗性。【结论】根据TvGST7重组蛋白具有巯基转移酶活性及TvGST7的表达提高了大肠杆菌对非生物胁迫的抗性,推测TvGST7基因在漆树中的表达对于维持漆树体内的正常代谢和清除非生物胁迫产生的氧化损伤起着重要作用。
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| 关 键 词： | 漆树 谷胱甘肽S-转移酶 酶比活力 胁迫耐受性 |
| 收稿时间： | 2019/5/30 0:00:00 |
Cloning and characterization analysis of glutathione S-transferase TvGST7 in Toxicodendron vernicifluum |
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| HE Xuegao,ZHAO Aiguo,and XIE Dongdong,et al.Cloning and characterization analysis of glutathione S-transferase TvGST7 in Toxicodendron vernicifluum[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2020,48(6):39-51. |
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| Authors: | HE Xuegao ZHAO Aiguo and XIE Dongdong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Toxicodendron vernicifluum glutathione S-transferase enzymatic specific activity stress tolerance |
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