| 枯草芽孢杆菌高效表达系统的构建 |
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| 引用本文： | 毕台飞,胡雄斌,宋 巍.枯草芽孢杆菌高效表达系统的构建[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2011,39(11):71-79. |
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| 作者姓名： | 毕台飞 胡雄斌 宋 巍 |
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| 作者单位： | 榆林学院 生命科学学院;西北农林科技大学 动物科技学院;西北农林科技大学 动物科技学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(30871813) |
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| 摘 要： | 【目的】优化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)启动子和表达宿主,构建其高效的表达系统,为重组枯草芽孢杆菌的研究和应用奠定基础。【方法】以β-半乳糖苷酶编码基因为报告基因,以诱导型的枯草芽孢杆菌麦芽糖操纵元启动子为调控元件、大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒为载体骨架,构建枯草芽孢杆菌高效表达载体pGJ222,将其电转化到B.subtilis 1A747菌株后进行诱导表达试验和葡萄糖抑制试验。利用同源重组的方法,用枯草芽孢杆菌组成型启动子P43替换了B.subtilis野生型菌株1A747麦芽糖操纵元的上游调控序列,得到优化重组表达宿主菌B.subtilis BCYL,将pGJ222转入B.subtilis BCYL后,对优化的表达系统进行诱导表达试验和葡萄糖抑制试验。分别用PCR扩增大肠杆菌和枯草芽孢杆菌维生素B12合成前期途径的谷氨酰-tRNA合成酶编码基因hemA,构建其表达载体,并将其转化B.subtilis BCYL中进行诱导表达检测。【结果】成功构建了枯草芽孢杆菌高效表达载体pGJ222,并实现了β-半乳糖苷酶的高效表达,其表达量占总可溶性蛋白的18%;质量分数5%的麦芽糖诱导24hβ-半乳糖苷酶活达到16U/mL。成功获得了优化重组表达宿主菌B.subtilis BCYL,其可使β-半乳糖苷酶活性有大幅度提高,在质量分数5%麦芽糖诱导24hβ-半乳糖苷酶活达到21U/mL,葡萄糖的抑制作用明显减弱。【结论】通过对启动子和表达宿主的优化,获得了枯草芽孢杆菌高效表达系统,为枯草芽孢杆菌基因工程研究提供了有力工具。
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| 关 键 词： | 枯草芽孢杆菌 表达系统 同源重组 β-半乳糖苷酶 |
| 收稿时间： | 5/2/2011 12:00:00 AM |
Construction of high-level expression system in Bacillus subtilis |
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| BI Tai-fei,HU Xiong-bin,SONG Wei,YANG Ming-ming.Construction of high-level expression system in Bacillus subtilis[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2011,39(11):71-79. |
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| Authors: | BI Tai-fei HU Xiong-bin SONG Wei YANG Ming-ming |
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| Institution: | BI Tai-fei1,HU Xiong-bin2,SONG Wei2,YANG Ming-ming2(1 College of Life Science,Yulin College,Yulin,Shaanxi 719000,China,2 College of Animal Science,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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