| 鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子-猪干扰素α1融合基因在大肠埃希菌中的可溶性表达及其生物学活性研究 |
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| 引用本文： | 胡涛,何志远,张文昌,赵俊,王明丽.鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子-猪干扰素α1融合基因在大肠埃希菌中的可溶性表达及其生物学活性研究[J].中国预防兽医学报,2019(6):579-583. |
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| 作者姓名： | 胡涛 何志远 张文昌 赵俊 王明丽 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学微生物学教研室;安徽九川生物科技有限公司 |
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| 基金项目： | 安徽省教育厅高校省级自然科学重大研究项目(KJ2012ZD08) |
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| 摘 要： | 为可溶性表达重组鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(ChGM-CSF)与猪干扰素α1(PoIFNα1)融合蛋白,并研究其生物学活性,本研究分别提取鸡、猪肝脏细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增ChGM-CSF和PoIFNα1基因,经linker连接上述两种基因后将其克隆于pET-32a原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE和western blot检测融合蛋白表达产物。在ST细胞/VSV病毒测定系统以细胞病变抑制法滴定该融合蛋白的抗病毒活性;同时用MTT法检测其对鸡淋巴细胞增殖活性的促进作用。结果显示,PCR扩增并融合后的ChGM-CSF和PoIFNα1融合基因约为1000bp,构建重组表达载体后,诱导表达的rChGM-CSF-PoIFNα1融合蛋白分子量约55ku,主要存在于破碎菌体的上清中,表达量较高。Westernblot检测结果显示,该融合蛋白分别能够与ChGM-CSF多抗和PoIFNα单克隆抗体特异性结合,其抗病毒比活性约为1.1×10^6IU/mg,并且具有促进鸡淋巴细胞增殖的活性。本研究为rChGM-CSF-PoIFNα1重组融合蛋白的研制及其相关活性的测定提供实验依据。
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| 关 键 词： | 鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(ChGM-CSF) 猪干扰素α1(PoIFNα1) 融合基因 可溶性表达 促淋巴细胞增殖 抗病毒活性 |
Soluble expression and activity analysis of chicken granulocyte macrophage-colony stimulating factor-porcine interferon alpha 1 fusion gene in Escherichia coli |
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| HU Tao,HE Zhi-yuan,ZHANG Wen-chang,ZHAO Jun,WANG Ming-li.Soluble expression and activity analysis of chicken granulocyte macrophage-colony stimulating factor-porcine interferon alpha 1 fusion gene in Escherichia coli[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2019(6):579-583. |
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| Authors: | HU Tao HE Zhi-yuan ZHANG Wen-chang ZHAO Jun WANG Ming-li |
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| Institution: | (Department of Microbiology,Anhui Medical University,Hefei 230032,China;Anhui Jiuchuan Biotechnology Co.,Ltd.,Wuhu 241000,China) |
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| Abstract: | HU Tao;HE Zhi-yuan;ZHANG Wen-chang;ZHAO Jun;WANG Ming-li(Department of Microbiology,Anhui Medical University,Hefei 230032,China;Anhui Jiuchuan Biotechnology Co.,Ltd.,Wuhu 241000,China) |
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| Keywords: | chicken granulocyte macrophage colony-stimulating factor (ChGM-CSF) porcine Interferon alpha 1 (PoIFNα1) fusion gene soluble expression promoting lymphocyte proliferation antiviral activity |
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