调控民猪ZBED6基因转录元件的筛选与分析 |
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引用本文: | 张冬杰,刘洋,汪亮,李忠秋,刘娣.调控民猪ZBED6基因转录元件的筛选与分析[J].中国畜牧杂志,2019(7):76-81. |
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作者姓名: | 张冬杰 刘洋 汪亮 李忠秋 刘娣 |
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作者单位: | 1.黑龙江省农业科学院畜牧研究所;2.农业农村部种养结合重点实验室;3.东北农业大学动物科技学院 |
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基金项目: | 黑龙江省科技攻关项目(GC12B311);黑龙江省科研机构创新能力提升专项(YC2016D001);国家生猪产业技术体系(CARS-37) |
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摘 要: | ZBED6是锌指蛋白家族的一员,在胎盘哺乳动物中极其保守,可通过对IGF2的调控参与骨骼肌生长。为进一步探究ZBED6基因自身的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过常规PCR扩增ZBED6基因启动子区系列截短片段,构建克隆质粒,通过双酶切和连接反应定向连入pGL3-basic载体,利用PK15细胞和双荧光素酶检测系统测定重组质粒的相对荧光素酶活性;利用在线软件预测启动子区的转录因子结合位点,使用重叠PCR定点缺失转录因子结合位点,构建突变载体并在PK15细胞中检测突变载体的相对荧光素酶活性。结果表明:ZBED6基因启动子区-2053^-1777 bp存在多个转录因子结合位点,尤其是-1808^-1777 bp,该片段缺失造成启动子活性下降(P<0.01);利用在线软件在该区间预测到3个转录因子HINFP、Adf-1和CREB3,经实验验证后发现这3个转录因子均可调控ZBED6基因的转录,其中Adf-1效果最为明显。据此推测,民猪ZBED6基因的转录调控机制较为复杂,其启动子区存在HINFP、Adf-1和CREB3等多个调控元件的结合位点。
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关 键 词: | ZBED6基因 启动子 荧光素酶活性 重叠PCR 民猪 |
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