小鼠诺如病毒数字RT-PCR定量检测方法的建立

为了建立快速、准确定量检测小鼠诺如病毒(murine norovirus, MNV)的方法,试验针对MNV高度保守区的靶向扩增引物和探针构建MNV的数字RT-PCR定量检测方法,优化其退火温度,并对其敏感性、特异性及临床应用效果进行检测。结果表明:建立的数字RT-PCR方法能对MNV进行定量检测;最佳退火温度为57.5℃;分别对MNV、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒3型等核酸检测,除MNV外均为阴性;最低可检测到7拷贝/μL;对不同稀释度核酸进行3次重复试验,变异系数均小于7%;对20个小鼠盲肠样本进行MNV检测,结果与荧光RT-PCR结果一致。说明试验建立的数字RT-PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可应用于MNV的临床快速定量检测。