| 山葡萄VaCIPK18原核表达与多克隆抗体制备 |
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| 作者姓名： | 吴楠 张宁波 郑巧玲 陈卫平 徐伟荣 |
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| 作者单位： | 1 宁夏大学农学院,宁夏 银川 750021; 2 葡萄与葡萄酒教育部工程研究中心,宁夏 银川 750021; 3 宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室,宁夏 银川 750021; 4 宁夏葡萄与葡萄酒研究院,宁夏 银川 750021; 5 宁夏农林科学院,宁夏 银川 750021 |
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| 基金项目： | 酿酒葡萄种质创新与现代栽培技术研究示范;宁夏回族自治区重点研发计划重大(重点)项目;国家科技重大专项;地区科学基金 |
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| 摘 要： | 类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CBLs)互作蛋白(CIPKs)作为类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在植物响应非生物胁迫信号转导中起着重要作用。基于前期山葡萄响应低温胁迫转录组测序结果,发现低温胁迫引发的早期伤害及感知阶段的激酶基因中涉及CBL-CIPK信号通路的VaCIPK18表达显著上调。为进一步研究山葡萄(Vitis amurensis)VaCIPK18激酶参与低温胁迫的功能,采用同源克隆获得了VaCIPK18基因,其开放阅读框为1 320 bp,编码439个氨基酸。基于对VaCIPK18蛋白生物信息学分析,获取胞外结构域中抗原表位丰富的肽段,并将其C端调控结构域(230～439 aa)构建到原核表达载体pET28a-SUMO。将重组表达载体转化至大肠杆菌(E.coli Rosetta)中,经0.8 mmol·L-1 IPTG、37℃诱导4 h表达出大小为42 kDa的包涵体蛋白。将重组蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,获得anti-VaCIPK18多克隆抗体,经检测具有高效价及特异性。Western Blot结果表明,该抗体可以与葡萄内源CIPK18特异性结合,且在50 k...
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| 关 键 词： | 山葡萄 CIPK18蛋白激酶 原核表达 多克隆抗体 Western blot检测 |
| 收稿时间： | 2019-05-23 |
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