近暗散白蚁 β-葡萄糖苷酶RpBgl7的异源表达及酶学性质研究 |
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引用本文: | 毛国涛,刘茜,王方园,苏丽娟,张宏森,宋安东.近暗散白蚁 β-葡萄糖苷酶RpBgl7的异源表达及酶学性质研究[J].河南农业科学,2020,49(7):68-74. |
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作者姓名: | 毛国涛 刘茜 王方园 苏丽娟 张宏森 宋安东 |
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作者单位: | 河南农业大学 生命科学学院,河南 郑州 450002;河南农业大学 生命科学学院,河南 郑州 450002;河南农业大学 生命科学学院,河南 郑州 450002;河南农业大学 生命科学学院,河南 郑州 450002;河南农业大学 生命科学学院,河南 郑州 450002;河南农业大学 生命科学学院,河南 郑州 450002 |
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摘 要: | 为研究近暗散白蚁(Reticulitermes perilucifugus)β-葡萄糖苷酶RpBgl7,利用生物信息学分析β-葡萄糖苷酶RpBgl7的家族及结构特点,构建RpBgl7的重组表达载体pCold-TF-RpBgl7,在大肠杆菌中过量表达并纯化,分析其最适反应条件和酶动力学参数。结果表明,RpBgl7属于糖苷水解酶1家族,具有2个保守的谷氨酸催化残基Glu187和Glu394。RpBgl7在BL21(DE3)中过量表达,经过镍离子亲和层析1步纯化可得到高纯度RpBgl7重组蛋白。以4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷为底物,测得RpBgl7的最适pH值为6.0,最适温度为70℃;动力学参数K_m=0.13 mmol/L,k_(cat)=3.15 s~(-1)。RpBgl7可耐受Na~+、K~+、Mg~(2+)、Cu~(2+)和Ba~(2+),而Ca~(2+)、Hg~(2+)和Fe~(3+)明显抑制RpBgl7的酶活力。
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关 键 词: | 近暗散白蚁 β-葡萄糖苷酶 大肠杆菌宿主 融合表达 纯化 酶学性质 金属离子耐受性 |
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