| 大豆胰蛋白酶抑制剂和脂肪氧化酶基因双价RNAi表达载体的改造及转化 |
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| 引用本文： | 王 丹,付永平,王丕武.大豆胰蛋白酶抑制剂和脂肪氧化酶基因双价RNAi表达载体的改造及转化[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2012,40(12):85-89. |
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| 作者姓名： | 王 丹 付永平 王丕武 |
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| 作者单位： | 吉林农业大学 生物技术中心;吉林农业大学 生物技术中心;吉林农业大学 生物技术中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（30971805，31171568）；吉林农业大学博士基金项目（201202） |
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| 摘 要： | 【目的】应用RNA干扰技术同时抑制大豆脂肪氧化酶(Lox)和胰蛋白酶抑制剂(KTi)基因的表达,改良大豆品质,培育缺失Lox和KTi的大豆新材料。【方法】应用RNAi原理,以双价RNAi植物表达载体pCAM-BIA1301-KtiRi-LoxRi为基础,以植物表达载体pCAMBIA3301的质粒DNA为模板,利用CaMV35S启动子的上游引物和CaMV35S终止子的下游引物,PCR扩增含有除草剂抗性基因bar的整个表达原件,然后将其插入到pCAM-BIA1301-KtiRi-LoxRi中,构建以除草剂为筛选标记的双价RNAi表达载体,并通过花粉管通道法转化至大豆吉农18、吉农28和吉农27 3个品种中,对转基因植株进行PCR、Southern杂交、RT-PCR分子水平检测和除草剂抗性检测。【结果】质粒PCR和酶切鉴定以及测序结果表明,双价RNAi植物表达载体pCAMBIA1301-KtiRi-LoxRi-bar构建成功。将其转入到大豆中,分别获得吉农18、吉农28、吉农27T1代籽粒47,25和86粒,以及T2代转基因植株50株。RT-PCR结果表明,转基因株系中脂肪氧化酶和胰蛋白酶抑制剂mRNA积累受到明显抑制。【结论】获得了转pCAMBIA1301-KtiRi-LoxRi-bar的T2代转基因大豆。
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| 关 键 词： | 大豆 胰蛋白酶抑制剂 脂肪氧化酶 花粉管通道法 除草剂 |
| 收稿时间： | 4/9/2012 12:00:00 AM |
Construction and transformation of RNAi plant expression vector of lipoxygenase and kunitz tripsin inhibitor genes from soybean |
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| WANG Dan,FU Yong-ping,WANG Pi-wu,MA Jian.Construction and transformation of RNAi plant expression vector of lipoxygenase and kunitz tripsin inhibitor genes from soybean[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2012,40(12):85-89. |
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| Authors: | WANG Dan FU Yong-ping WANG Pi-wu MA Jian |
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| Institution: | (College of Agronomy,Jilin Agricultural University,Changchun,Jilin 130118,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | soybean kunitz tripsin inhibitor lipoxygenase pollen tube pathway barstar |
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