大豆两个MYB 转录因子基因的克隆及表达分析

 【目的】克隆新的植物MYB转录因子基因，进行序列分析，并对其功能进行初步鉴定。【方法】RT-PCR法结合RACE-PCR法分离克隆MYB基因cDNA全长序列；酵母系统检测其转录激活活性；半定量RT-PCR检测目的基因在植物体中的表达情况，及对类黄酮代谢途径中生物合成酶的影响。【结果】根据植物中MYB基因DNA结合域保守区设计简并引物，以大豆品种中豆27的叶片为材料，RT-PCR扩增出两个MYB基因同源片段；据此设计基因特异引物，通过RACE-PCR分离克隆出两个新的MYB基因GmMYBZ1、GmMYBZ2。酵母系统检测表明，GmMYBZ2具有转录激活功能，β－半乳糖苷酶活性为10.35 U；半定量RT-PCR在中豆27的茎和叶中检测到GmMYBZ1的表达，而GmMYBZ2在植物的根、茎、叶及未成熟种子中均有表达；对转基因烟草的RT-PCR检测结果显示，GmMYBZ2的表达可抑制类黄酮代谢途径中PAL、C4H、4CL、CHS、CHI、F4H及FLS等生物合成酶基因的表达。【结论】从大豆栽培品种中豆27中克隆出了两个新的MYB基因GmMYBZ1、GmMYBZ2；功能研究表明，GmMYBZ2可能参与植物类黄酮合成调控。