LIPI-4 EII对单核细胞增生性李斯特菌关键毒力因子转录调控的影响

为探究单核细胞增生性李斯特菌(LM)毒力岛4(LIPI-4)中膜透性酶(EII)对LM毒力基因表达的调控作用，本研究分别构建EII缺失株(LM928ΔEII)、强启动子回补株(CLM928ΔEII-P_help)和天然启动子回补株(CLM928ΔEII-P_native)，测定各菌株在体外培养中的生长曲线和在永生化人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)内的增殖情况；RT-qPCR检测体外培养和HCMEC/D3细胞内各菌株9个关键毒力基因的转录水平。结果显示:1)EII基因缺失株LM928ΔEII构建成功，重组回补质粒pIMK2-EII和pIMK2-EII-P_native及回补株CLM928ΔEII-P_help和CLM928ΔEII-P_native构建成功。2)在体外培养下，EII对LM的生长曲线没有影响。但在侵染HCMEC/D3后，LM928ΔEII在8和12 h的胞内细菌量显著高于LM928(P<0.05)，2和4 h的胞内细菌量极显著高于LM928(P<0.01)，CLM928ΔEII-P_native在2、4和6 h恢复至野生株水平(P>0.05)，而CLM928ΔEII-P_help在2、4、6、8、10和12 h均极显著低于野生株(P<0.01)。3)体外培养条件下，相比于野生株，LM928ΔEII中66.7%(6/9)的毒力基因转录水平极显著上调(P<0.01)；CLM928ΔEII-P_help中66.7%(6/9)的基因转录水平上升1~4倍，CLM928ΔEII-P_native中88.9%(8/9)的基因转录水平倍数变化在1倍以内。在HCMEC/D3细胞内，相比于野生株，LM928ΔEII中66.7%(6/9)的毒力基因转录水平极显著上调(P<0.01)；CLM928ΔEII-P_help中33.3%(3/9)的基因转录水平上调1~3倍，CLM928ΔEII-P_native中基因转录水平倍数变化在1倍以内。综上，LIPI-4 EII对LM关键毒力因子的转录具有负调控作用。本研究为系统探究LIPI-4参与LM致病性机制奠定基础。