可变剪接体WNT4-β对山羊卵泡颗粒细胞增殖和激素分泌的影响

旨在研究WNT4的一个可变剪接体（WNT4-β）对山羊卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取4~6月龄健康母羊20只，采集双侧卵巢，体外分离卵泡颗粒细胞进行培养。通过免疫荧光染色技术确定WNT4-β的表达位置；在山羊颗粒细胞中过表达或干扰WNT4-β后，利用RT-qPCR、Western blot检测WNT4-β和WNT信号通路中关键标记因子ROA1、RHOA及颗粒细胞增殖标记基因cyclin-D2、CDK4的表达变化；CCK-8技术检测颗粒细胞增殖情况；并通过ELISA分析颗粒细胞中生殖激素水平的变化。免疫荧光染色结果显示，WNT4-β只在山羊卵泡颗粒细胞中表达，在卵母细胞不表达；过表达WNT4-β后，WNT4-β和颗粒细胞增殖因子cyclin-D2、CDK4的mRNA相对表达量极显著增加（P<0.01），蛋白表达水平显著增加（P<0.05）；WNT信号通路标记因子ROA1、RHOA mRNA表达水平显著增加（P<0.05），β-catenin蛋白表达水平显著增加（P<0.05）；干扰WNT4-β后，WNT4-β、cyclin-D2、CDK4、ROA1和RHOA 的mRNA表达显著降低（P<0.05），WNT4-β、cyclin-D2、CDK4及β-catenin蛋白表达显著降低（P<0.05）。CCK-8结果显示，过表达WNT4-β促进颗粒细胞增殖（P<0.05）；ELISA结果显示，过表达WNT4-β后，颗粒细胞中雌二醇（estradiol，E₂）水平显著增加（P<0.05），孕酮（progesterone，P₄）水平升高但不显著（P>0.05）；干扰WNT4-β后则结果相反，颗粒细胞增殖受到抑制（P<0.05），E₂和P₄的水平显著降低（P<0.05）。综上所述，WNT4可变剪接体WNT4-β通过调控WNT信号通路促进山羊卵泡颗粒细胞增殖及类固醇激素分泌，本研究为解析WNT4调控山羊颗粒细胞增殖的潜在分子机制提供理论基础。