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| 尼罗罗非鱼外周血白细胞总RNA的分离及反转录验证 | |
| 引用本文： | 李超,陈明,黄维义,王瑞,余晓丽,黄婷,雷爱莹,梁万文.尼罗罗非鱼外周血白细胞总RNA的分离及反转录验证[J].淡水渔业,2010,40(2). |
| 作者姓名： | 李超 陈明 黄维义 王瑞 余晓丽 黄婷 雷爱莹 梁万文 |
| 作者单位： | 1. 广西大学动物科学技术学院,南宁,530051;广西水产研究所,南宁,530021 2. 广西水产研究所,南宁,530021;农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室/中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,江苏无锡,214081 3. 广西大学动物科学技术学院,南宁,530051 4. 广西水产研究所,南宁,530021 |
| 基金项目： | 国家科技支撑计划，农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室开放基金，广西科技计划应用基础研究项目 |
| 摘 要： | 应用Trizol一步法对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)外周血白细胞总RNA提取方法进行优化,通过β-ac-tin基因反转录对所分离到的总RNA进行质量验证,并对mRNA的冻干浓缩进行了探讨,确定了一套快速、高效的尼罗罗非鱼外周血白细胞总RNA分离和mRNA浓缩体系。结果显示:获得的总RNA纯度较高,OD260/OD280均在1.9~2.0之间;甲醛变性电泳显示,总RNA完整性良好,28S与18S比值为2∶1;总RNA的分离量与起始白细胞量成正比,每毫升Trizol最大裂解量为1×108个白细胞,可得到总RNA量约为90μg;总RNA的分离量在前四个小时随着沉淀时间的增长而增加,并成功进行了β-actin基因的反转录。mRNA的分离率为1.08%,通过冻干浓缩成功使其浓度提高9倍。结果表明:分离到的总RNA质量可充分满足下游分子生物学实验要求,所建立的mRNA浓缩方法简单易行,可完全解决mRNA起始浓度低的难题。 |
| 关 键 词： | 尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus) 外周血白细胞 总RNA mRNA 冻干浓缩 |
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