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| 边界病病毒E2蛋白质的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 | |
| 引用本文： | 毛立,刘霞,李文良,杨蕾蕾,张纹纹,魏建忠,江杰元.边界病病毒E2蛋白质的原核表达及间接ELISA检测方法的建立[J].江苏农业学报,2015,31(1). |
| 作者姓名： | 毛立 刘霞 李文良 杨蕾蕾 张纹纹 魏建忠 江杰元 |
| 作者单位： | 1. 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京,210014 2. 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036 3. 安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥,230036 |
| 基金项目： | 江苏省农业科技自主创新基金项目 |
| 摘 要： | 边界病病毒(Border disease virus,BDV)是导致绵羊和山羊繁殖障碍的重要病原。为了建立检测BDV特异抗体的ELISA方法,本研究将BDV基因克隆入原核表达载体p ET-32a(+),并构建重组表达菌,经SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白质。以纯化的重组表达蛋白质为抗原,建立间接ELISA(r E2-ELISA)检测方法。通过反应条件优化,确定抗原包被浓度4.0μg/ml;封闭液为20 g/L BSA;血清最佳稀释度为1∶50,孵育1 h;二抗最佳稀释倍数为1∶30 000,作用45 min;以TMB为底物显色10 min。用该ELISA方法检测瘟病毒属的CSFV、BVDV阳性血清,结果均为阴性。对187份山羊血清样品进行临床检测,与Svanova试剂盒检测结果阳性符合率为76.25%,总符合率为74.87%;上述检测方法同时与Western blot鉴定结果进行比较,结果显示,Western blot结果与r E2-ELISA检测结果的符合率为79.55%,高于与Svanova试剂盒检测的符合率(72.73%)。表明建立的间接ELISA检测方法可适用于临床BDV血清样品的抗体检测。 |
| 关 键 词： | 边界病病毒 E2蛋白质 间接ELISA |
Prokaryotic expression of border disease virus E2 and establishment of an indirect ELISA for serum antibody detection |
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| MAO Li,LIU Xia,LI Wen-liang,YANG Lei-lei,ZHANG Wen-wen,WEI Jian-zhong,JIANG Jie-yuan.Prokaryotic expression of border disease virus E2 and establishment of an indirect ELISA for serum antibody detection[J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences,2015,31(1). | |
| Authors: | MAO Li LIU Xia LI Wen-liang YANG Lei-lei ZHANG Wen-wen WEI Jian-zhong JIANG Jie-yuan |
| Abstract: | |
| Keywords: | border disease virus E2 protein indirect ELISA |
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