牛巨噬细胞天然抗性蛋白Ⅰ基因可变剪接体(NRAMPI-ISO)的克隆及在细胞和组织中的表达

巨噬细胞天然抗性蛋白1 (NRAMP1)可抑制结核分枝杆菌(Mycobacterium)和布氏杆菌(Brucella)等多种胞内寄生病原菌的感染,提高动物机体的抗病能力.本研究从秦川牛脾脏中克隆了NRA MP1基因的一种可变剪接体NRA MPI-ISO,序列分析表明,NRA MPI-ISO比NRAMP1多了第3个内含子,从而导致编码序列提前终止于第3个内含子,NRA MPI-ISO编码200个氨基酸.为了探索可变剪接体NRAMPI-ISO的表达情况,本研究分别构建了原核表达载体pET-41-NRA MPI-ISO和真核表达载体pEGFP-NRA MPI-ISO.原核表达载体pET-41 -NRA MPI-ISO可在不同浓度的IPTG诱导下在大肠杆菌BL21中高效表达.真核表达载体pEGFP-NRA MPI-ISO转染牛成纤维细胞后,EGFP-NRAMP 1-ISO融合蛋白分布在细胞核和细胞质中,而正常的NRAMP1蛋白只分布在细胞质的溶酶体膜周围.半定量RT-PCR检测表明,NRA MPI-ISO基因在心、脾脏、肺脏等组织有较高的表达,而在脑、胰、生殖嵴中的表达量相对较低.本研究为进一步研究NRA MPI-ISO基因生物学功能提供了重要信息.