环形泰勒虫HSP90原核表达与中药单体筛选 |
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引用本文: | 葛晓敏,李才善,缪荣浩,郑会珍,温丽翠,郭庆勇.环形泰勒虫HSP90原核表达与中药单体筛选[J].中国兽医学报,2023(12):2495-2501. |
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作者姓名: | 葛晓敏 李才善 缪荣浩 郑会珍 温丽翠 郭庆勇 |
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作者单位: | 新疆农业大学动物医学学院 |
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基金项目: | 新疆维吾尔族自治区高校科研计划自然科学基金资助项目(XJEDU202010008); |
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摘 要: | 旨在克隆、表达环形泰勒虫HSP90基因并筛选与其结合的中药单体。对新疆地方环形泰勒虫株HSP90基因进行PCR扩增、克隆测序,并构建系统进化树。对HSP90蛋白理化特性、高级结构与亚细胞定位进行预测分析。构建原核表达载体HSP90-pET32a,筛选诱导表达条件,经镍株纯化重组蛋白并用Western blot检测其免疫原性。使用DrugRep服务器对靶向环形泰勒虫HSP90的中药单体筛选。结果显示,HSP90基因编码的蛋白序列与小泰勒虫序列(登录号:XP 766455)同源性较高。HSP90蛋白编码223个氨基酸,理论pI为8.4,具有28个磷酸化位点。HSP90蛋白二级结构以α-螺旋(66.37%)和无规则卷曲(19.28%)为主,存在多个B细胞抗原表位,亚细胞定位主要分布于细胞质。HSP90-pET32a蛋白相对分子质量约50 ku, 0.2 mmol/L IPTG诱导3 h蛋白表达较好。Western blot结果显示,该蛋白具有较好的免疫原性。经虚拟筛选,发现了5种与环形泰勒虫HSP90有较好结合力中药单体,其中圣草次甙结合力最强(affinity=-8.5 kJ/mol),作...
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关 键 词: | 环形泰勒虫 HSP90 原核表达 中药单体筛选 |
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