| 茶树二氢黄酮醇4-还原酶基因的克隆、表达及功能分析 |
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| 引用本文： | 王云生,许玉娇,胡晓婧,蒋晓岚,杨琴,李伟伟,刘亚军,高丽萍,夏涛.茶树二氢黄酮醇4-还原酶基因的克隆、表达及功能分析[J].茶叶科学,2013(3):193-201. |
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| 作者姓名： | 王云生 许玉娇 胡晓婧 蒋晓岚 杨琴 李伟伟 刘亚军 高丽萍 夏涛 |
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| 作者单位： | 安徽农业大学生命科学学院;安徽农业大学教育部茶叶生物化学与生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(NO.31000314、NO.31170647、NO.31170282、NO.31270730) |
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| 摘 要： | 茶树二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)是儿茶素合成途径中的关键酶。本研究采用RT-PCR技术,获得了茶树二氢黄酮醇4-还原酶基因(CsDFR)的开放阅读框,它编码含347个氨基酸的蛋白质,推测分子量为38.69 kD,等电点为6.02。成功地将该基因重组到表达载体SUMO上,并在大肠杆菌BL21中进行原核表达;优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG浓度;纯化出目的蛋白。利用HPLC-MS方法对重组蛋白进行了体外酶活检测,结果表明目的蛋白具有DFR酶活性,可催化DHQ和DHM的还原反应。
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| 关 键 词： | 茶树 二氢黄酮醇4-还原酶 原核表达 酶活性 |
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