| J亚群禽白血病SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 王莉,黄安宁,李槿年,张丹俊,刘雪兰.J亚群禽白血病SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立[J].中国预防兽医学报,2013,35(9). |
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| 作者姓名： | 王莉 黄安宁 李槿年 张丹俊 刘雪兰 |
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| 作者单位： | 1. 安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥,230036
2. 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所,安徽合肥,230031 |
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| 基金项目： | 安徽省科技攻关战略性新兴产业项目，国家自然基金项目 |
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| 摘 要： | 为建立一种能够快速、灵敏和特异地检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,本研究以ALV-J原型病毒株HPRS-103的pol基因3′端与gp85编码基因之间的保守区域(5 258 bp～5 802 bp)为检测目的片段,构建重组质粒并作为靶基因,通过对其浓度、引物浓度和退火温度的优化,建立了ALV-J SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法.结果显示该方法的最低检测限度为2.36×102拷贝/μL,比普通PCR高100倍;与其他禽源病毒无交叉反应;批内和批间变异系数均小于5％.表明本研究建立的方法具有良好的特异性、稳定性和灵敏性.采用该方法对100只临床病鸡进行检测,ALV的检出率为44％.随机选择10只感染阳性鸡,检测病毒基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的分布与表达水平,结果表明ALV-J在各主要脏器中均有分布,但以肾脏中的病毒表达量最高.
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| 关 键 词： | J亚群禽白血病病毒 SYBR Green Ⅰ 荧光定量PCR 病毒基因表达水平 |
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