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| 牛传染性鼻气管炎病毒内标荧光定量PCR检测方法的建立与应用 | |
| 引用本文： | 季新成,牛国辉,员丽娟,张彦明,李鹏,段晓东,于学辉.牛传染性鼻气管炎病毒内标荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J].中国兽医学报,2010,30(6). |
| 作者姓名： | 季新成 牛国辉 员丽娟 张彦明 李鹏 段晓东 于学辉 |
| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学,陕西,杨凌712100;新疆出入境检验检疫局,新疆,乌鲁木齐,830063 2. 新疆大学,新疆,乌鲁木齐,830000 3. 新疆出入境检验检疫局,新疆,乌鲁木齐,830063 4. 西北农林科技大学,陕西,杨凌712100 |
| 基金项目： | 国家质量监督检验检疫总局资助项目 |
| 摘 要： | 根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列,设计高度保守的引物和荧光探针,并扩增包含有荧光PCR扩增区域的核酸片段,通过凝胶纯化回收,将该片段克隆至pMD18-T载体,经鉴定后获得目标模板。通过碱基重排和引物设计,用搭桥法PCR扩增,获得BHV1荧光定量PCR内标模板。对内标模板的添加量和反应条件进行优化,建立了含有内标物的荧光定量PCR检测体系。该体系可以检测到10个拷贝/PCR反应的重组质粒,对BHV1可检测到0.01TCID50的病毒粒子,灵敏度比常规PCR和病毒分离高10～100倍,与不加内标的荧光PCR检测灵敏度相当。更重要的是,内标模板可以对反应体系进行监测,指示并校正假阴性结果,从而达到提高PCR检测准确率的目的。对临床收集的40份牛精液(其中8份已经鉴定为阳性)和10份牛鼻腔拭子(其中2份已经鉴定为阳性)用该体系进行检测,均得到预期结果。该方法的建立可用来对临床样品中BHV1的快速检测和实验室的质量控制。 |
| 关 键 词： | 牛传染性鼻气管炎病毒 荧光定量PCR 内标 共扩增 |
Establishment and application of fluorescent quantitative real-time PCR with in-ternal amplification control for the detection of infectious bovine rhinotracheitisvvirus |
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| JI Xin-cheng,NIU Guo-hui,YUN Li-juan,ZHANG Yan-ming,LI Peng,DUAN Xiao-dong,YU Xue-hui.Establishment and application of fluorescent quantitative real-time PCR with in-ternal amplification control for the detection of infectious bovine rhinotracheitisvvirus[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2010,30(6). | |
| Authors: | JI Xin-cheng NIU Guo-hui YUN Li-juan ZHANG Yan-ming LI Peng DUAN Xiao-dong YU Xue-hui |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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