| 奶牛干细胞多能性基因Nanog和Lin28克隆分析及其逆转录病毒表达载体的构建与包装 |
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| 引用本文： | 吕长荣,陈冬梅,辛晓玲,窦忠英.奶牛干细胞多能性基因Nanog和Lin28克隆分析及其逆转录病毒表达载体的构建与包装[J].中国兽医学报,2010,30(1). |
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| 作者姓名： | 吕长荣 陈冬梅 辛晓玲 窦忠英 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学,动物医学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心,陕西,杨凌,712100 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，陕西省科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 以50~60日龄的Holstein奶牛胎儿原始生殖嵴组织为材料,通过RT-PCR的方法克隆奶牛Nanog与Lin28基因开放性阅读框(ORF)全序列。序列全长分别为903 bp和618 bp。所克隆的奶牛Nanog与Lin28基因序列与GenBank中已经发表的参考序列进行比对同源性均为100%。将扩增的基因片段经过酶切后亚克隆到反转录病毒载体pMSCVneo的多克隆位点,经过酶切、PCR和测序鉴定正确后,应用lipofectamine2000介导转染PT67包装细胞,经过14 d G418连续抗性筛选,挑选抗性集落扩大培养。收集病毒上清经过RT-PCR与透射电镜检测,并用NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果表明,病毒上清中含有逆转录病毒颗粒,Nanog与Lin28基因在筛选后的包装细胞PT67细胞中均有转录,病毒上清感染滴度值分别达到7.5×107cfu/mL和9.19×107cfu/mL。结果表明,本试验已经成功克隆出奶牛Nanog与Lin28基因开放性阅读框全序列,并建立高效、稳定产生包含有pMSCV-Nanog与pMSCV-Lin28质粒的感染性病毒颗粒的包装细胞株,为进一步产生奶牛诱导性多能干细胞(Induced pluripotentstem cells,iPSCs)奠定基础。
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| 关 键 词： | Nanog基因 Lin28基因 pMSCV逆转录病毒载体 诱导性多能干细胞 奶牛 |
Sequencing analysis of cow Nanog gene and Lin28 gene and construction of theirs recombinant retroviral expression vectors |
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| LU Chang-rong,CHEN Dong-mei,XIN Xiao-ling,DOU Zhong-ying.Sequencing analysis of cow Nanog gene and Lin28 gene and construction of theirs recombinant retroviral expression vectors[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2010,30(1). |
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| Authors: | LU Chang-rong CHEN Dong-mei XIN Xiao-ling DOU Zhong-ying |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Nanog gene Lin28 gene retroviral vector pMSCVneo induced pluripotent stem cells (iPSCs) cow |
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