| 国槐SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选 |
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| 引用本文： | 孙荣喜,宗亦臣,郑勇奇.国槐SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选[J].广西林业科学,2014(4). |
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| 作者姓名： | 孙荣喜 宗亦臣 郑勇奇 |
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| 作者单位： | 国家林木遗传育种重点试验室 国家林业局林木培育重点实验室中国林业科学研究院林业研究所，国家林业局植物新品种分子测试实验室，北京 100091 |
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| 基金项目： | 国家林业公益性行业科研专项重大项目，“十二五”国家科技支撑计划项目 |
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| 摘 要： | 为建立国槐(Sophora japonica)最佳SRAP-PCR反应体系,采用正交试验设计L16(45)对影响PCR体系的5个因素(模板浓度、引物浓度、Mg2+浓度、Taq聚合酶和d NTP用量)4个水平进行了优化,确定了国槐的最优SRAP-PCR反应体系:Taq聚合酶1.5 U,d NTPs 0.30 mmol/L,模板DNA 90 ng,Mg2+2.0 mmol/L,引物0.3μmol/L,dd H2O补至20μL。各因素对PCR反应的影响从大到小依次为:Taq聚合酶d NTPs模板DNAMg2+引物。基于最佳SRAP体系,采用4个品种对120对引物进行筛选,共获得12对多态性好的引物组合。随机抽取两对引物基于毛细管电泳技术对此体系进行稳定性检验,扩增条带清晰、稳定、多态性高。该体系的建立以及筛选的引物组合为为进一步利用SRAP技术对国槐的遗传多样性、品种鉴定等方面的研究奠定基础。
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| 关 键 词： | 国槐 SRAP-PCR 体系优化 引物筛选 毛细管电泳 正交设计 |
Optimization of SRAP-PCR Reaction System and Primer Screening for Sophora japonica |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Sophora japonica SRAP-PCR optimization primer screening capillary electrophoresis orthogonal design |
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