肠炎沙门菌SPI-19编码的hcp基因的克隆、表达及多抗制备 |
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引用本文: | 姚丰华,张钰,朱国强.肠炎沙门菌SPI-19编码的hcp基因的克隆、表达及多抗制备[J].中国家禽,2014(10). |
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作者姓名: | 姚丰华 张钰 朱国强 |
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作者单位: | 扬州大学兽医学院;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; |
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基金项目: | 国家自然科学基金(30571374、30771603、31072136、31270171);江苏高校优势学科建设工程资助项目 |
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摘 要: | 利用PCR方法扩增2株肠炎沙门菌参考株CMCC(B)50336和SD-2 SPI-19毒力岛内的hcp基因,将其序列鉴定后克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒pET28a-hcp,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导重组细菌高效表达;表达产物以包涵体的形式存在,变性条件下用镍亲和柱纯化得到重组蛋白,以每只50μg剂量免疫小鼠3次,间接ELISA测定抗体效价,用Western blot验证免疫血清的特异性。测序结果显示,2个参考株hcp基因的核苷酸序列与已发表序列的同源性为100%。SDS-PAGE显示20 ku重组蛋白,主要以包涵体形式存在,通过镍亲、层析和尿素变性/复性获得了可溶性的纯化蛋白;免疫小鼠第5周抗体效价达1∶8 000,且能特异性检测出SPI-19 hcp+肠炎沙门菌和鸡伤寒沙门菌中表达的Hcp蛋白。上述结果表明,制备的外源性重组蛋白具有较好的免疫原性和反应原性,为进一步研究Ⅵ型分泌系统Hcp蛋白在肠炎沙门菌中的功能提供了重要的生物素材。
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关 键 词: | 肠炎沙门菌 SPI- hcp基因 克隆 表达 |
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