| 人CD14信号肽介导卵清蛋白在HEK293T细胞的高效表达 |
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| 引用本文： | 能昌爱,李秀锦,仲飞,李振,张峰,陈慧慧,张考,韩冬梅.人CD14信号肽介导卵清蛋白在HEK293T细胞的高效表达[J].动物营养学报,2012,24(11):2165-2171. |
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| 作者姓名： | 能昌爱 李秀锦 仲飞 李振 张峰 陈慧慧 张考 韩冬梅 |
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| 作者单位： | 1. 燕山大学环境与化学工程学院,秦皇岛,066004
2. 河北农业大学动物医学院,河北省兽用生物制品工程技术研究中心,保定071001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，河北省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 本试验将人CD14信号肽序列与卵清蛋白（ovalbumin,OVA）基因融合,旨在提高OVA在非输卵管上皮细胞中的表达。提取鸡输卵管上皮细胞总RNA,经反转录合成的cDNA,再利用修饰的特异性引物,通过PCR从cDNA中分别扩增出5’端与人CD14信号肽序列融合和非融合的OVA基因,并将它们分别插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成表达载体pcDNA-CD14sp-OVA和pcDNA-OVA。经磷酸钙介导,将质粒转染至HEK293T细胞,使其进行表达,用鼠抗OVA单克隆抗体通过免疫印迹（Western blot）法检测OVA表达水平。结果表明:本试验扩增的OVA基因序列与GenBank中的序列（登录号NM205152）一致,构建的人CD14信号肽序列融合OVA基因的表达载体结构正确。经过在HEK293T细胞的表达,融合人CD14信号肽序列的重组蛋白OVA的表达水平明显得到提高。结果提示,融合人CD14信号肽序列后的重组蛋白OVA在非输卵管上皮细胞中的表达水平明显提高,为OVA基因作为DNA疫苗模式抗原的应用提供了必要的条件。
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| 关 键 词： | 卵清蛋白 人CD14信号肽 重组蛋白表达 HEK293T细胞 |
Highly Expression of Ovalbumin in HEK293T Cells Mediated by Human CD14 Signal Peptide |
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| NENG Chang'ai
,
LI Xiujin
,
ZHONG Fei
,
LI Zhen
,
ZHANG Feng
,
CHEN Huihui
,
ZHANG Kao
,
HAN Dongmei.Highly Expression of Ovalbumin in HEK293T Cells Mediated by Human CD14 Signal Peptide[J].Acta Zoonutrimenta Sinica,2012,24(11):2165-2171. |
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| Authors: | NENG Chang'ai LI Xiujin ZHONG Fei LI Zhen ZHANG Feng CHEN Huihui ZHANG Kao HAN Dongmei |
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| Institution: | 1.College of Environmental and Chemical Engineering,Yanshan University,Qinhuangdao 066004,China; 2.College of Veterinary Medicine,Agricultural University of Hebei,Hebei Engineering and Technology Research Center of Veterinary Biological Products,Baoding 071001,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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