| 猪繁殖与呼吸综合征病毒E蛋白在Marc-145细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 田志平,薛江东,霍晓伟,等.猪繁殖与呼吸综合征病毒E蛋白在Marc-145细胞中的表达[J].中国兽医学报,2014(4):546-550. |
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| 作者姓名： | 田志平 薛江东 霍晓伟 等 |
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| 作者单位： | ;1.内蒙古民族大学动物科技学院 |
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| 摘 要： | 针对PRRSV E基因设计1对带有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,以PRRSV CC-1株为模版进行RT-PCR扩增,获得带有酶切位点的目的片段插入pMD18-T载体,对阳性重组质粒进行测序鉴定。将阳性质粒进行EcoRⅠ、SalⅠ双酶切,回收目的片段将其插入EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的真核表达载体pEGFP-N1中构建重组质粒pEGFP-N1-E,将重组质粒用脂质体转染Marc-145细胞,通过荧光显微镜观察显示,在转染后24h出现荧光,48h出现荧光高峰,筛选阳性细胞株,进行目的基因转录、Western blot检测目的蛋白的表达鉴定。结果表明:成功构建真核表达载体pEGFP-N1-E,建立了稳定表达的细胞株。为研究E蛋白如何与宿主细胞结合形成通道,PRRSV吸附、穿入宿主细胞的作用机理以及筛选特效的粒子通道阻断剂奠定了基础。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 E蛋白 表达 细胞株 |
Expressing of porcine reproductive and respiratory syndrome virus E protein in Marc-145 cell lines |
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