| 小反刍兽疫病毒N基因部分片段克隆表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 祁光宇,刘斌,陈晓宇,王赛错,苟慧天,黄银君,穆克斌,刘学荣.小反刍兽疫病毒N基因部分片段克隆表达及鉴定[J].东北农业大学学报,2013(9):86-90. |
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| 作者姓名： | 祁光宇 刘斌 陈晓宇 王赛错 苟慧天 黄银君 穆克斌 刘学荣 |
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| 作者单位： | 中农威特生物科技股份有限公司;中国农业科学院兰州兽医研究所 |
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| 基金项目： | 甘肃省科技计划项目(1104NKCA167) |
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| 摘 要： | 根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,在此基础上设计2对特异引物分别对N1、N5基因扩增和对N1和N5基因进行搭桥PCR连接,经测序分析后将N1-N5基因片段和原核表达载体pET-32a(+)相连接,构建pET-32a-N1-N5质粒。将pET-32a-N1-N5转化于TransB(DE3)原核表达感受态细胞后用IPTG诱导表达,将纯化重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果表明,所表达蛋白以可溶性形式表达并具有能与PPRV阳性标准血清发生特异性反应,为建立快速检测小反当兽疫病毒抗体水平诊断方法奠定基础。
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| 关 键 词： | 小反刍兽疫病毒 N1-N5基因 搭桥PCR 原核表达 可溶性 SDS-PAGE Western-blot |
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