快速检测细菌性腹泻3种厌氧菌多重PCR方法的建立和应用

为快速检测厌氧菌引起的细菌性腹泻，建立一种产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、艰难梭菌(Clostridium difficile)和脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)的多重PCR检测方法，本试验参照GenBank中产气荚膜梭菌Cpa基因序列、艰难梭菌Glud基因序列和脆弱拟杆菌Leu基因序列上设计合成了3对特异性引物(目的片段分别为326、750 bp和448 bp),通过对PCR反应条件的优化建立多重PCR检测方法。结果显示，多重PCR能从试验的产气荚膜梭菌、艰难梭菌、脆弱拟杆菌扩增出其目的条带，而其他细菌均不能扩增出目的条带；多重PCR对产气荚膜梭菌、艰难梭菌和脆弱拟杆菌的最低检出量分别为1.6×10^-2、0.7pg/μL和2.8pg/μL。结果表明本试验建立的多重PCR方法具有良好的稳定性与特异性，为鉴别诊断这3种致病厌氧细菌所导致的腹泻提供一种快速、准确的检测方法。