| 猴源rab基因shRNA文库及其稳定细胞株的构建 |
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| 引用本文： | 郭珍珍,鲁绍芳,樊爽爽,李国利,韩立强,鲁维飞,王江,陈丽颖,杨国宇,褚贝贝.猴源rab基因shRNA文库及其稳定细胞株的构建[J].中国兽医学报,2018(3):469-475. |
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| 作者姓名： | 郭珍珍 鲁绍芳 樊爽爽 李国利 韩立强 鲁维飞 王江 陈丽颖 杨国宇 褚贝贝 |
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| 作者单位： | 河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室; |
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| 摘 要： | 为揭示Rab蛋白在猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵进入宿主细胞后的功能,本研究以PRRSV易感的猴胚胎肾上皮细胞Marc-145为模型,构建了针对猴源rab基因的短发夹RNA(shRNA)文库。此文库中的shRNA以pLKO.1为载体质粒,与pMD2.G和psPAX2包装质粒共同转染HEK293T/17细胞,获得慢病毒;利用慢病毒感染Marc-145,通过puromycin筛选获得稳定抑制猴源rab基因表达的细胞株。通过荧光定量PCR方法检测各细胞株中rab基因的敲减效率。本试验构建的文库包含187个克隆、涉及62种rab基因。荧光定量PCR结果证明,筛选出的稳定细胞株中相应rab基因mRNA的表达量均有显著下降。结果显示本试验成功构建了猴源rab基因shRNA文库并筛选出了稳定细胞株,可用于后续进一步研究Rab蛋白在PRRSV生活周期中发挥的重要功能。
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| 关 键 词： | rab基因 shRNA文库 PRRSV 慢病毒 Marc-145细胞 稳定细胞系 |
Construction of shRNA library of Chlorocebus sabaeus rabgenes and the establishment of stable transfected cell lines |
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