BVDV一步法双重荧光RT-PCR检测方法的建立及应用 |
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引用本文: | 王建昌,王金凤,崔元,刘立兵,袁万哲.BVDV一步法双重荧光RT-PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医学报,2018(2):245-251. |
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作者姓名: | 王建昌 王金凤 崔元 刘立兵 袁万哲 |
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作者单位: | 河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心;河北农业大学动物医学院; |
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摘 要: | 为实现对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的快速检测和分型,本试验根据GenBank已发表的BVDV1和BVDV2 5′UTR基因特异性保守区域设计特异性引物和探针,以体外转录病毒RNA作为模板,建立了BVDV1和BVDV2一步法双重荧光RT-PCR方法。结果显示,双重荧光RT-PCR对BVDV1和BVDV2的检测下限均为102拷贝;具有较强的特异性,对口蹄疫病毒、猪瘟病毒、Hobi样病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、施马伦贝格病毒等病毒核酸的扩增均为阴性;BVDV1和BVDV2的扩增均在102~107拷贝内呈现良好的线性关系,标准曲线的相关系数(R2)分别为0.999和0.998;方法重复性好,BVDV1和BVDV2的变异系数(CV值)分别在0.68%~1.87%和1.25%~1.90%。本试验对665份样品进行检测,共检出BVDV阳性样品45份,其中BVDV1阳性样品39份,BVDV2阳性样品5份,BVDV1和BVDV2均阳性样品1份。结果表明,本试验建立的BVDV一步法双重荧光RTPCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,可广泛应用于BVDV的快速检测、分型和流行病学调查。
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关 键 词: | 牛病毒性腹泻病毒 一步法:双重荧光RT-PCR 检测 分型 |
Development and application of a one-step dual real-time RT-PCR for detection and typing of bovine viral diarrhea virus |
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Abstract: | |
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